长片段RT-PCR试剂盒TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1

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等温扩增酶
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cDNA合成 & 克隆

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NGS相关制品

NGS 学习中心单细胞 RNA-Seq 单细胞 DNA-Seq RNA-Seq DNA-Seq 生殖健康表观遗传学分析免疫库分析单细胞分选系统 NGS关联制品 PCR酶（NGS用）前代RNA-Seq/DNA-Seq制品
自动化系统

自动化学习中心高通量单细胞分选系统ICELL8 cx 及其应用高通量Real-Time PCR系统自动化NGS文库制备系统高通量单细胞分选系统ICELL8应用
核酸提取、纯化及DNA标记

DNA片段、质粒DNA纯化基因组DNA纯化试剂(柱式法) 基因组DNA纯化试剂(试剂型) RNA提取、纯化试剂(柱式法) RNA提取、纯化试剂(试剂型) RNA保存试剂 Small RNA提取试剂体液样品exosome提取试剂病毒核酸纯化试剂盒酵母核酸纯化试剂盒核酸提取及纯化制品-Others DNA标记标记DNA-蛋白质的回收
限制酶

限制酶基本信息常规限制酶系列产品 QuickCut限制酶 RNA限制酶
电泳相关制品

核酸染料 DNA Markers RNA Markers 蛋白质Markers Agarose Loading Buffer 常用缓冲液方便装电泳相关装置
蛋白质互作研究（酵母杂交系统）

Takara酵母杂交学习中心 Matchmaker^® Gold酵母双杂系统 Matchmaker^® Gold酵母单杂系统互作的确认和评价 Matchmaker相关制品
表达调节及蛋白质性能分析

iDimerize^™蛋白质互作诱导系统 ProteoTuner^™蛋白质调节系统 Tet诱导表达系统
蛋白质表达相关制品

E.coli蛋白质表达 Brevibacillus/Bacillus蛋白质表达哺乳动物细胞蛋白质表达昆虫细胞蛋白质合成(Clontech) 无细胞蛋白质合成系统 Protein Refolding
蛋白质纯化、分析和检测

Capturem新型膜技术应用蛋白质样品制备 His标签融合蛋白质纯化 GST标签融合蛋白质纯化生物素标签融合蛋白质纯化 DYKDDDDK标签融合蛋白质纯化 Myc标签融合蛋白质纯化抗体纯化蛋白质IP&Co-IP 糖/磷酸化蛋白质纯化蛋白质检测蛋白质电泳胶染色蛋白质定量蛋白酶（His标签去除）蛋白酶（氨基酸序列分析）
基因导入（Virus、Vectors）

病毒基因传递系统选择向导重组慢病毒(Lentivirus)制品重组逆转录病毒(Retrovirus)制品重组腺相关病毒(AAV)制品重组腺病毒(Adenovirus)制品哺乳动物细胞用载体酵母、丝状真菌用载体植物用载体
转染试剂

Xfect转染试剂选择向导质粒转染试剂 RNA转染试剂 Protein转染试剂
干细胞研究相关制品

干细胞学习中心干细胞基因操作 (Cell reprogramming) 细胞 (Cell) 细胞培养产品 (Cell culture) 抗体 (Antibodies) 分化试剂盒和多能性监测 (Pluripotency and Differentiation ) 基因编辑（Gene Editing）
表观遗传学相关制品

甲基化DNA富集相关制品 PCR/qPCR相关制品 Control Genome DNA 甲基化DNA相关酶制品亚硫酸氢盐处理相关制品
基因组编辑相关制品

CRISPR/Cas9 Cre重组酶基因敲入用长单链DNA制备
荧光蛋白质 & 报告系统

荧光蛋白质按颜色、名称分类荧光蛋白质按用途分类荧光蛋白质相关制品报告系统
抗体 & ELISA & 细胞信号转导

细胞增殖、细胞毒性测定细胞凋亡（Takara）细胞凋亡（Clontech） EIA试剂盒（Takara）免疫染色关联制品细胞信号转导（Clontech）酶活性测定试剂盒脂肪细胞、骨细胞分化试剂抗体（Takara）
细胞 & 培养相关制品

细胞培养相关制品细胞生物学检测试剂细胞解冻仪器
microRNA & RNAi研究相关制品

RNA合成提取及纯化制品 microRNA定量PCR miRNA表达 Small RNA克隆 shRNA表达检测合成siRNA定量 RNAi相关制品
Library & cDNA & RNA

Human cDNA libraries series Mouse cDNA libraries series Rat cDNA libraries series cDNA、Genome DNA Total RNA & Poly A⁺ RNA
糖工学相关制品

糖工学酶糖工学试剂盒 Glycosphingolipid解析试剂
应用检测（食品-环境-人）

活菌DNA检测相关制品防污染相关制品食物中毒检测（PCR）食物中毒检测 (Real Time PCR) 食物中毒检测 (按Target选择) 肉种鉴定相关制品水质检测人感染症检测菌种鉴定支原体检测
仪器相关制品

PCR仪器支持中心 Q-PCR仪 E-PCR仪电泳仪器产品
Clontech相关组分信息表

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技术服务信息

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长片段RT-PCR试剂盒TaKaRa RNA LA PCR^™ Kit (AMV) Ver.1.1
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR012A	TaKaRa RNA LA PCR^™ Kit (AMV) Ver.1.1	100 Rxns	￥3,952

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※ 上表中产品货期不定，请您在下单前咨询当地代理商。

■ 制品内容 (100 次量^*1)

AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (来源于Avian Myeloblastosis Virus)	50 μl
RNase Inhibitor^*2 (40 U/μl)	25 μl
Random 9 mers^*2 (50 pmol/μl)	50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl)	50 μl
RNase Free dH2O	1 ml
TaKaRa LA Taq (5 U/μl)	25 μl
M13 Primer M4^*2 (20 pmol/μl)	50 μl
10X RNA PCR Buffer	120 μl
100 mM Tris-HCl (pH8.3)
500 mM KCl
10X LA PCR Buffer II (Mg²⁺ Free)	500 μl
dNTP Mixture (各10 mM)	150 μl
MgCl2 (25 mM)	1 ml
Control F-1 Primer^*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物)	25 μl
Control R-1 Primer^*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物)	25 μl
Positive Control RNA^*2 (2 × 10⁵ copies/μl) (Transcribed poly(A)⁺ RNA of pSPTet3 plasmid)	25 μl

1：本试剂盒可用于100次反应 (总反应量：RT 反应10 μl, PCR反应 50 μl) 2：【各种引物序列】

引物名称	各引物序列
Random 9 mers	5′-NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer	包含dT区域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer	5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer	5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4	5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′

*3：【Positive Control RNA】

本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kbp的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)⁺ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时，该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。

图1. Positive Control RNA：使用各种引物所能扩增的DNA片段

■ 制品说明

TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1使用TaKaRa LA Taq酶，实现反转录后的更长更准确的PCR反应。TaKaRa LA Taq酶是Takara Bio公司研制的LA (long and accurate) PCR^*反应的关键组成。
本试剂盒利用LA Technology的优势特点，用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 来源的反转录酶，由RNA反转录至cDNA，然后再在同一反应管中用TaKaRa LA Taq扩增此cDNA，操作简单，使用方便。本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特别设计，使从Poly (A)⁺ RNA 3’端合成cDNA的效率更高，从而可以利用3’-RACE法高效扩增RNA的3′端未知区域。
*：U.S.Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC.

■ 保存

-20℃。

■ 特点

RNA模板	适用于所有RNA
扩增片段大小	～12 kb
反转录酶	AMV Reverse Transcriptase (反转录反应温度在42℃～60℃)
DNA Polymerase	TaKaRa LA Taq
RNase Inhibitor	试剂盒中含有
合成cDNA第一条链的引物	Random 9 mers或Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游PCR Primer 可供选择
3′-RACE法	RT反应时使用Oligo dT-Adaptor Primer PCR反应时下游引物使用M13 Primer M4
操作	在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)

■ 使用注意

1. 当同时需要进行多个反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等试剂时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。
5. PCR反应条件
最适的PCR条件因PCR扩增仪的不同而不同，建议在进行样品实验前先试做一下Control实验。
6. 引物选择
用于反转录的引物可视实验具体情况选择Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物。对于不具有Hairpin构造的短链mRNA，3种引物中的任何一种都可以使用，但一般应按以下方法进行选择。

Random 9 mers	适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。用Random 9 mers合成的cDNA进行PCR反应时，使用任何一对特异性引物都能获得良好的扩增。
Oligo dT-AdaptorPrimer	适用于具有Poly(A)⁺ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物Primer 的rRNA及tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA不具有Poly(A)⁺ Tail)。本Primer设计巧妙，反转录效率高。反转录反应后，可用M13 Primer M4进行3’-RACE实验。
特异性下游PCR Primer (PCR时的下游引物)	因其必须与模板序列互补，所以只适用于Target序列已知的情况。

页面更新：2023-11-01 16:23:15

技术信息

操作方法

反转录反应中引物的选择、RNA样品的制备、操作注意事项标准操作流程

实验案例

长链mRNA（约12 kb）的扩增 3′-RACE法实验例