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B. subtilis Secretory Protein Expression System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3380 B. subtilis Secretory Protein Expression System 10 Rxns ¥5,007
 
■ 制品内容 (文库制作10次量)
SP DNA mixture (0.032 pmol/μl)*1 45 μl
pBE-S DNA (0.5 μg/μl)*2 20 μg
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock)*3 100 μl x 2
   
*1:与In-Fusion®克隆系统搭配使用,可编码来源于B. subtilis 的173种分泌信号肽的DNA混合物。
*2:溶于TE buffer(pH8.0)。
*3:Marburg 168 derivative : trpC2, lys1, aprEΔ3, nprR2, nprE18
 
【注意】本制品仅限用于科研目的,凡用于商业用途,须获得Takara公司授权许可。了解详细信息以及获取相关许可文件,请致电4006518761或邮件联络service@takarabiomed.com.cn
 
■ 制品说明
使用Bacillus subtilis 作为宿主菌有利于重组蛋白质的可溶性和分泌性表达,尤其适用于含二硫键等复杂结构的蛋白质表达。与大肠杆菌表达系统相比,B. subtilis 表达的重组蛋白质不含内毒素。
T. Eggert等人的研究表明,重组蛋白的分泌水平受信号肽种类的影响十分显著。Takara Bio公司现已开发出一种使用B. subtilis 筛选分泌蛋白有效表达的系统。该系统能够从包含173种B. subtilis 来源的分泌信号肽的文库中,鉴定出适合靶蛋白分泌表达的信号肽。但是,由于B. subtilis 的质粒拷贝数非常低,因此很难在B. subtilis 中构建质粒。本系统使用pBE-S DNA作为E. coliB. subtilis 之间的穿梭质粒,从而可以在E. coli 中构建和传递表达质粒。
本系统包括:
SP DNA mixture——B. subtilis 分泌信号肽的DNA文库
B. subtilis / E. coli 穿梭载体pBE-S DNA
B. subtilis strain RIK1285
SP DNA mixture 包含能够编码173种B. subtilis分泌信号肽的DNA片段(用于In-Fusion克隆)。pBE-S DNA载体含有能够在B. subtilis 中发挥作用的pUB110来源的复制起始位点(pUB ori)和一个卡那霉素抗性基因(Kanr),以及能在E.coli 中发挥作用的pUC来源的复制起始位点(CoIE ori)和一个氨苄青霉素抗性基因(Ampr)。此外,在多克隆位点(MCS)和His-Tag序列的上游,还有一段B. subtilis 来源的枯草杆菌蛋白酶启动子(aprE promoter)和分泌信号肽 (aprE SP)序列。含有目的基因的pBE-S DNA载体可使用限制性内切酶Mlu I 和Eco52 I线性化,然后通过Clontech的In-Fusion®克隆方法,就可以替换aprE SP(参见下方质粒图谱),引入SP DNA mixture中的173种分泌信号肽的DNA文库,这样就可以为目的蛋白质筛选到合适有效的分泌信号肽。
由于pBE-S DNA载体与E.coli 冷休克表达系统的pCold 载体 (Code No.: 3360~3365 和 3371)的多克隆位点相同,因此目的基因可以很容易地在这些载体之间转移。试剂盒中提供的宿主菌B. subtilis RIK1285有两种蛋白酶缺陷,因此适用于目的蛋白质的分泌表达。
 
■ 保存
SP DNA mixture和pBE-S DNA : -20℃
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock) : -80℃
 
■ 使用注意
1. 可以选择使用In-Fusion HD Cloning Kit (Cat. #639648/639649/639650),结合使用Stellar Comptent Cells (Cat. #636763/636766)。
2. SP DNA mixture是由PCR扩增获得的DNA片段,因此,PCR扩增的副产物如引物二聚体等也可能被克隆,但几率较低。
 
 
 

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