本制品是采用TB Green嵌合荧光法进行One Step Real Time RT-PCR反应的专用试剂。使用本制品进行Real Time RT-PCR反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,并能有效防止污染。本反应体系由于可以对扩增产物进行实时检测,大大提高了检测灵敏度,并省略了PCR反应后的电泳步骤,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。
使制品中使用了一种新的反转录酶PrimeScript PLUS RTase,具有很强的链置换活性,且在短时间内有效合成cDNA;和高效的热启动PCR酶TaKaRa Ex Taq® HS组合,能进行高灵敏度和高效率检出。另外,本制品使用了含抗Taq抗体的TaKaRa Ex Taq HS热启动PCR酶和适合Real Time PCR的Buffer大大地提高了反应的特异性。本制品中的这些酶结合Takara Bio RT-PCR技术,可更有效地扩增RT-PCR产物。
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■ 保存 |
-20℃。
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2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 请于-20℃避光保存。 |
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■ 试剂盒特长 |
1. 进行Real Time One Step RT-PCR反应,可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA 进行分析。
2. 新的反转录酶PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS组合,能进行高灵敏度和高效率检出;含抗Taq抗体的TaKaRa Ex Taq HS热启动PCR酶,能有效抑制非特异性扩增,大大提高了反应的特异性。
3. 在2×浓度的Premix中,预先混有TB Green,PCR反应液配制时,操作简单方便。 |
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■ 注意事项 |
1. 当同时需要进行数次Real Time One Step RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各种酶等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS 时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 融解后如有不溶物请充分混合,使用Vortex 等振荡完全溶解后使用。
4. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的) 枪头、Microtube等,尽量避免污染。
5. 制品只能使用基因特异性反转录引物,不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等进行反转录反应。 |
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