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Competent Cell Preparation Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9139 Competent Cell Preparation Kit 200 Rxns ¥190
 
■ 制品内容 (200 次量)
Solution A 20 ml
Solution B 20 ml
 
■ 制品说明
大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA (Plasmid DNA、Phage DNA等),处于这种状态的细胞称为感受态细胞 (Competent Cell)。在基因工程实验中,经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种:一种是购买商品化的感受态细胞,但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难 (超低温);另一种是自己制备感受态细胞,实验人员自己制作感受态细胞时,往往受到各种试剂及实验条件等限制,制备的感受态细胞效率低,达不到实验要求。
Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要,并且适用于大多数常用的大肠杆菌,例如:E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mutS等,转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上 (转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
 
■ 保存
4℃。
 
■ 注意事项
1. 制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率,因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后,建议用去离子水浸泡一晚,然后再充分洗净。
2. 制作感受态细胞时使用的菌种,不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种,在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后,挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞,能提高转化效率。
3. 培养感受态细胞制备用菌体时,OD600值的测定应随时进行,以使OD600值控制在0.35~0.5之间。如果OD600值超出此范围,可能降低感受态细胞的转化效率。
4. 用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理,不要将培养液过长时间室温放置,在冰中放置时也不要时间过长。
5. 感受态细胞的制备操作过程中,离心后弃上清时要尽量弃尽,否则会降低感受态细胞的转化效率。
6. 使用Solution A、Solution B悬浮沉淀时要用手指轻轻弹动Microtube管壁,禁止剧烈振荡操作。
7. 为了有效确认感受态细胞的转化效率,建议制作一批高纯度的质粒DNA分装低温 (-20℃) 保存,用作阳性对照,以确认每批制作的感受态细胞的转化效率。
 
 

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