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■ 制品内容 |
| E.coli HST08 Premium Competent Cells |
100 μl × 10 |
| pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品说明 |
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出具有很高转化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外，E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (这些基因是大肠杆菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株，这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及亚克隆。当和较大质粒一起使用时，也可维持较高转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和基因文库构建时，可与TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。
*：与其他相同基因型的感受态细胞相比较。
对于pUC系列质粒，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选阳性克隆。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 细胞浓度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ- |
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 质量标准 |
[1] 转化效率
转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。 |
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| ■ 注意事项 |
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。 |
| 3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。 |
| 4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 |
| ·L-plates： 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 |
| 6. 当使用X-Gal 时，按照以下操作进行： |
| 将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 |
| 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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