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■ 制品内容 |
| E.coli DH5α Competent Cells |
100 μl × 10 |
| pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品说明 |
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。
E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 细胞浓度 |
| 1 - 2×109 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 质量控制 |
| 1. 转化效率 |
转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19 |
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| 2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 |
| 当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。 |
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| ■ 注意事项 |
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。 |
| 3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。 |
| 4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。 |
| ·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。 |
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| 6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： |
| ·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。 |
| 7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。 |
| 8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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