Takara

E.coli DH5α Competent Cells

质粒载体转化方法

1. E.coli DH5α Competent Cells 使用前在冰上融化。

2. 轻微混匀，取100 μl装入14 ml 圆底 tube中（BD Falcon 352059 或352057）。

注意：不能剧烈振荡混合细胞。

3. 加入DNA样品（建议≤10 ng）。

4. 冰中放置30分钟。

5. 42℃放置45秒。

6. 冰中放置1-2分钟。

7. 添加SOC培养基（预先在37℃保温）至终体积1 ml。

8. 37℃振荡培养1小时（160-225 rpm）。

9. 取适量涂布于选择培养基^*。

10. 37℃过夜培养。

*：直径9cm的平板的涂布量不超过100 μl。如有需要，使用步骤7中的培养基进行稀释。

注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φ b-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。

用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：

·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。

7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。

8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。