| GMP级别Cas9，更高生产标准的Cas9蛋白供您选择！ | |||||||||||||
| 作为基因编辑的重要元件，Cas9核酸酶的选择非常重要。在实验过程中能否选择并使用到一款优质的Cas9核酸酶，对实验成功与否起着决定性的作用。 为了满足更多临床研究试验的需求，面向需要更高产品品质的用户，Takara提供批次差异更小的Recombinant Cas9 Protein GMP grade，即GMP级别的Cas9核酸酶。 | |||||||||||||
| 该级别产品在制造过程中不使用人源或动物源成分，已通过日本药品与食品安全局（PFSB）的GMP级别标准生产测试，得到生产许可，并在该标准下进行制造和品质管理，适用于体外细胞工程和基因治疗研究。 | |||||||||||||
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| Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade是目前广泛用于基因组编辑的重组野生型酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）来源的Cas9蛋白质（SpCas9），其C端携带猿猴病毒40（SV40）核定位信号NLS（nuclear-localization signal）。 SpCas9与来源于同种细菌的特定基因座CRISPR所转录的sgRNA形成核糖核蛋白（RNP：Ribonucleoprotein）复合物，导入至细胞内可以序列特异性切断双链DNA[参考文献1]，被广泛用于包括哺乳动物细胞在内的各种细胞，进行高效率的基因组编辑 [参考文献2-3]。 本Cas9蛋白质溶液成分经过了优化，对哺乳动物细胞具有良好的耐受性，可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤。将此Cas9蛋白质和sgRNA制备的RNP复合物，通过电穿孔、显微注射等方式导入至靶细胞进行敲除实验，经验证该Cas9蛋白质溶液对哺乳动物细胞具有良好的耐受性。 |
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| 实验例1. Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade与其他公司同类产品的性能对比 | |||||||||||||
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| 人iPS细胞中细胞表面蛋白的敲除实验。在该实验中，使用X、Y两家公司的同类产品以及Takara GMP级重组Cas9蛋白（T230）分别与sgRNA 组成RNP复合物，并通过电穿孔的方式导入人iPS细胞中，分别或同时对两种细胞表面蛋白A、B进行敲除。用流式细胞仪测定所得细胞的表面蛋白A、B的表达量，绘制蛋白敲除效率图（%）。 | |||||||||||||
| 数据由京都大学iPS细胞研究与应用中心（CiRA）Drs. Akitsu Hotta和 Huaigeng Xu提供。 | |||||||||||||
| 实验例2. Takara Recombinant Cas9 Protein GMP grade的基因编辑性能评估 | |||||||||||||
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| 敲除293T/17细胞系中CD81。在本实验中，将Guide-it Recombinant Cas9 (632641)和Recombinant Cas9 Protein GMP grade(T230)两种Cas9蛋白分别与sgRNA组成的RNP复合物通过电穿孔的形式导入到293T/17细胞中。条件1、2、3实验脉宽均为20 ms，并分别在1,300、1,200和1,100 V的电压条件下进行电穿孔。将在上述导入条件下导入RNP的细胞培养7天后，与PE标记的抗CD81抗体反应，通过FCM分析测定CD81阴性细胞率（%），结果显示，与Guide-it Recombinant Cas9比较，产品“T230”具有与“产品632641”相同的基因编辑效率。 | |||||||||||||
| 其他热销 Cas9产品推荐 | |||||||||||||
| ◆ 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)/(10 μg/μl) | |||||||||||||
| Takara有来源于野生型酿脓链球菌的重组Cas9蛋白质，助力基因编辑，锚定靶点切割！Guide-it Recombinant Cas9有多种蛋白质浓度产品，可满足电穿孔、显微注射等多种不同复合物导入方式。C末端的NLS核定位信号可以实现快速有效的突变导入，且经过不断的产品优化，已证实对哺乳动物细胞具有良好的耐受性，可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤，使脱靶效应更小化的同时，更容易实现高效率的基因编辑。 | |||||||||||||
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| 其他关联产品推荐 | |||||||||||||
| ◆ sgRNA的体外转录和筛选系统 | |||||||||||||
| 可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了体外转录和纯化sgRNAs，以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率，可用于CRISPR/Cas9 研究中sgRNA的制备、纯化和评价。 | |||||||||||||
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| √ 通过体外转录有效制备用于CRISPR/Cas9基因编辑高品质sgRNA的简便试剂盒 √ 所制备sgRNA可用于体外剪切活性确认实验和突变导入实验 √ sgRNA的产量、简便性及性价比进一步优化提升 |
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| Takara Guide-it™产品线长期致力于基因编辑实验的解决方案！更多基因编辑相关资料欢迎您点击下载CRISPR/Cas9基因编辑完整解决方案宣传册，或直接观看在线讲座视频CRISPR/Cas9基因编辑全套操作和解决方案。 | |||||||||||||
| 参考文献： 1) Jinek M, Chylinsky K, Fonfara I, Hauer M, Doudna J A, and Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. Science. (2012) 337 (6096): 816-821. 2) Liang X et al. Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection. J Biotechnol. (2015) 208: 44-53. 3) Sander J D and Joung J K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat Biotechnol. (2014) 32: 347-355 |
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页面更新：2022-12-16 11:16:13
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