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当前位置:首页> 产品选择指南 > 基因组编辑相关制品 > CRISPR/Cas9 > 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg ¥6,845
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 100 μg ¥2,701
无标题文档
 
Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)(Code No. 632641/632640)产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ,产品内容没有发生变化。(2021年5月)
 
 
          基因敲除    
          编辑效率检测 细胞基因型确认 Indel序列确认
sgRNA设计工具 sgRNA合成及筛选 CRISPR-Cas9导入方法            
  基因敲入        
          基因敲入检测        
 
 
降低脱靶效应,可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较,脱靶效应受到明显抑制
· NLS(核定位信号)有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明:
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes,适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低,特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较,避免了残留Cas9基因的持续表达,有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程,C末端的NLS(核定位信号)可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物,sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)
 
■ 实验例:
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复(HDR)效率
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34+造血干细胞中检测同源重组修复(HDR)效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中,包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析,确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点,因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合,通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞,采用Guide-it Mutation Detection Kit(Code No. 631448)确认突变导入效率,%即表示基因编辑效率。如图所示,Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
-70℃
(注意)避免反复冻融。首次溶解之后,建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 电穿孔装置:
Neon Transfection System(Thermo Fisher Scientific)或者 4-D Nucleofector System(Lonza)
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(Code No. 632635):用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636):用于确认制备的sgRNA的有效性
 
 
产品详情请点击:
 
 
■ 关联资料
相关资料:
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