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重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632678 Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 200 μg ¥4,755
Clontech 632679 Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 500 μg ¥8,868
无标题文档
 
 
          基因敲除    
          编辑效率检测 细胞基因型确认 Indel序列确认
sgRNA设计工具 sgRNA合成及筛选 CRISPR-Cas9导入方法            
  基因敲入        
          基因敲入检测        
 
 
Guide-it Recombinant Cas9是一种重组野生型酿脓链球菌Cas9核酸酶,在C-端进行了核定位信号(NLS)修饰,可用于CRISPR/Cas9介导的基因编辑实验。通过电穿孔的方式将Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物导入至哺乳动物细胞,在使脱靶效应最小化的同时,更容易实现高效率的基因编辑实验
 
Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl)甘油含量为50%,这款Cas9蛋白质溶液已被证实是无菌的,并且无论是和单向导RNA(sgRNA)形成核糖核蛋白复合物(RNP)通过电穿孔的方式导入用于基因敲除实验,还是作为RNP与供体修复模板一起导入用于基因敲入实验,都具有良好的哺乳动物细胞耐受性。
 
sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)
 
GMP级别的重组Cas9蛋白质Recombinant Cas9 Protein GMP grade(Code No. T230)请点击这里查看。
 
■ 概览
· 这款Cas9蛋白质溶液是无菌的,且哺乳动物细胞耐受性良好
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System配合使用可实现高效率编辑
· 优于质粒导入系统,脱靶效应更低
· 对难转染细胞系效果好
 
■ 实验例:
人诱导多能干细胞(hiPSC)CD81基因敲除效果。在本实验中,将Cas9-sgRNA RNP复合物通过电穿孔方式导入至hiPSC-18 和hiPSC-22两种诱导多能干细胞中敲除CD81基因。CD81抗体染色后流式细胞术检测结果显示,电穿孔10天后hiPSC-18的敲除效率为91%,hiPSC-22的敲除效率为85%,显示出非常高的基因编辑效率。
 
AAVS1和CXCR4基因同源定向修复。Panel A. 这些图表展示了CD34+造血干细胞的HDR实验是如何完成的。将含有Hind III酶切位点的ssDNA模板插入AAVS1基因中,将同时含有Hind III和Bam HI酶切位点的模板插入CXCR4基因中。每侧同源臂长度为90 bp。Panel B. 将修复模板和Cas9/sgRNA RNPs通过电穿孔导入后,用PCR扩增靶细胞中各目标基因,并进行酶切分析。编辑效率显示在凝胶上每个阳性孔上面。CXCR4基因经过BamH I酶切后显示出一条额外条带,原因是基因编辑前野生型基因中已经存在一个BamH I位点了。基因编辑5天后,我们证实98%的造血干细胞CD34+染色阳性。
 
数据来源于Takara Bio USA, Inc.
Cellartis hiPSC-18细胞系基因敲除。通过剪切后条带的强度可以对编辑细胞所占的百分比进行半定量估计。与其他品牌推荐的制备向导RNA的方法相比,Guide-it Recombinant Cas9与Guide-it In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA结合使用,可以为许多靶点提供一致且有效的基因编辑。凝胶底部的每个数字代表所示RNP的基因编辑效率(以百分比表示)。
 
CD3+ Pan T细胞治疗相关基因的敲除。在本实验中,电穿孔导入Cas9/sgRNA RNPs至 CD3+Pan T细胞进行单基因敲除(B2MPD-1)或双基因敲除(B2M+PD-1TRAC+TRBC)。细胞解冻后,在LymphoONE培养基中生长,并用ImmunoCult人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂激活处理3天。然后按照Guide-it Recombinant Cas9(10 μg/μl)操作指南,将RNP复合物通过电穿孔方式导入至细胞,设置3个平行实验组。对于双基因敲除,单独制备靶向各目标基因的RNP复合物,然后与细胞混合进行电穿孔。电穿孔7天后,使用流式细胞仪检测基因敲除频率。
 
CD3+ Pan T细胞中B2M基因的敲除。在本实验中,将Cas9/sgRNA RNPs通过电穿孔导入至CD3+ Pan T细胞中,以敲除B2M基因。细胞解冻后,在LymphoONE培养基中生长,并用ImmunoCult人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂激活处理3天。然后按照Guide-it Recombinant Cas9(10 μg/μl)操作指南,将RNP复合物通过电穿孔导入至细胞,设置3个平行实验组。电穿孔7天后,用流式细胞仪检测基因敲除频率和细胞活力。
 
Technical Notes
Improved CRISPR/Cas9 genome editing in hard-to-transfect mammalian cells using AAV
 
 
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