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当前位置:首页> 产品选择指南 > 基因组编辑相关制品 > CRISPR/Cas9 > CRISPR/Cas9导入方法
 
CRISPR/Cas9导入方法
 
对于哺乳动物细胞基因编辑,我们通常建议导入由Cas9蛋白质和单向导RNA(sgRNA)组成的核糖核蛋白(RNP)复合物。 与其他方法相比,RNP在细胞中停留的时间短,剂量小,可降低细胞毒性,减少非靶标位点的基因编辑。
 
RNP可以通过重组Cas9蛋白质以及体外转录的向导RNA以电穿孔的方式或使用由细胞衍生的纳米囊泡来导入。我们还提供使用慢病毒、腺相关病毒和质粒进行导入的试剂盒。
 

■ 通过电穿孔方法导入RNPs
重组Cas9蛋白质-电穿孔级别
我们的Cas9蛋白质可以实现高效的基因编辑,包括iPS和造血干细胞。
   
sgRNA体外转录
该试剂盒为Cas9介导的基因编辑提供了制备和评估sgRNAs效率的简便方法。
 

■ 使用细胞纳米囊泡(gesicles)导入RNPs
Gesicle制备系统
了解Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System产品组成和工作流程。
   
Gesicles可用于广泛细胞类型
可以制备含有定制sgRNA/Cas9核糖核蛋白复合物的细胞纳米囊泡,并用于广泛细胞类型基因编辑。
   
Gesicles可降低脱靶效应
本技术说明讨论了使用CRISPR/Cas9细胞纳米囊泡进行基因编辑可避免不必要的脱靶效应。
 

■ 使用病毒或者质粒进行CRISPR介导的基因编辑
使用AAV进行CRISPR/Cas9基因编辑
对于转染哺乳动物细胞类型来说,很难通过质粒转染来导入Cas9和sgRNA,借助病毒转导可以有效克服这一困难。
   
质粒系统
克隆和表达单向导RNA的质粒系统,使用CRISPR/Cas9技术进行哺乳动物细胞基因编辑。
   
慢病毒系统
慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统,其中Lenti-X Tet-On 3G系统能够实现四环素诱导的Cas9表达。