CRISPR/Cas9导入方法 | |
对于哺乳动物细胞基因编辑,我们通常建议导入由Cas9蛋白质和单向导RNA(sgRNA)组成的核糖核蛋白(RNP)复合物。 与其他方法相比,RNP在细胞中停留的时间短,剂量小,可降低细胞毒性,减少非靶标位点的基因编辑。 | |
RNP可以通过重组Cas9蛋白质以及体外转录的向导RNA以电穿孔的方式或使用由细胞衍生的纳米囊泡来导入。我们还提供使用慢病毒、腺相关病毒和质粒进行导入的试剂盒。 |
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■ 通过电穿孔方法导入RNPs | |
重组Cas9蛋白质-电穿孔级别 我们的Cas9蛋白质可以实现高效的基因编辑,包括iPS和造血干细胞。 |
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sgRNA体外转录 该试剂盒为Cas9介导的基因编辑提供了制备和评估sgRNAs效率的简便方法。 |
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■ 使用细胞纳米囊泡(gesicles)导入RNPs | |
Gesicle制备系统 了解Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System产品组成和工作流程。 |
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Gesicles可用于广泛细胞类型 可以制备含有定制sgRNA/Cas9核糖核蛋白复合物的细胞纳米囊泡,并用于广泛细胞类型基因编辑。 |
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Gesicles可降低脱靶效应 本技术说明讨论了使用CRISPR/Cas9细胞纳米囊泡进行基因编辑可避免不必要的脱靶效应。 |
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■ 使用病毒或者质粒进行CRISPR介导的基因编辑 | |
使用AAV进行CRISPR/Cas9基因编辑 对于转染哺乳动物细胞类型来说,很难通过质粒转染来导入Cas9和sgRNA,借助病毒转导可以有效克服这一困难。 |
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质粒系统 克隆和表达单向导RNA的质粒系统,使用CRISPR/Cas9技术进行哺乳动物细胞基因编辑。 |
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慢病毒系统 慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统,其中Lenti-X Tet-On 3G系统能够实现四环素诱导的Cas9表达。 |
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页面更新:2020-03-18 16:09:23