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改良型T7 RNA聚合酶PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2560A PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) 20,000 U ¥2,613
无标题文档
 
■ 制品内容(Code No. 2560A)
PrimeCap™ T7 RNA Polymerase(low dsRNA) (200 U/μl) 20,000 U
10X T7 RNA Polymerase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
PrimeCap T7 RNA Polymerase(low dsRNA)是改良的T7 RNA聚合酶*,兼具Cap类似物依赖性RNA合成、低dsRNA生成和耐热性(~52℃)的特点。使用了本酶和Cap类似物的体外转录 (IVT),可大量制备具有高加帽效率的高质量mRNA,同时大幅减少具有免疫原性dsRNA的生成。因此,本制品适用于疫苗等RNA医药领域的研发。
*以T7启动子序列为模板,NTP为底物的双链DNA,通过转录启动子下游区域,在体外合成单链RNA的酶。
 
典型的T7启动子序列和转录起始点(使用 CleanCap Reagent AG(TriLink公司)时的注意事项)
用于制备IVT反应的模板DNA的典型T7启动子序列如下所示。需要根据要合成的RNA序列和用于5'-cap修饰的Cap类似物的特性来设计模板,因此,请根据实验目的准备模板DNA。
 
[使用CleanCap Reagent AG时]
建议转录起点(+1 位置)的 NGG 序列为 AGG
[合成未加帽的RNA或使用ARCA时]
建议转录起点(+1 位置)的 NGG 序列为 GGG
 
■ 保存
-20℃
 
■ 起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant.
 
■ 性质
1. 分子量:约99.8 kDa
2. 辅因子:Mg2+
 
■ 活性定义
在 37℃,1 小时内使 1 nmol [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
 
■ 用途
1. 使用Cap类似物合成带帽的mRNA(共转录加帽)
2. 用于酶法加帽的无帽RNA的合成
※ 与使用Cap类似物时相比,RNA产量减少10%~40%。
 
■ 使用注意
1. 酶不要剧烈搅拌。
2. 当dsDNA模板、试剂、试管或微量移液器吸头被RNase污染时,合成的RNA产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染,例如戴一次性手套和使用专门用于 RNA实验的试管和微量移液器吸头。
3. 为了合成长度一致的RNA,通常使用线性dsDNA(例如线性化质粒和PCR产物)用于体外转录。我们建议模板DNA末端应为5’-突出或平端,以避免出现非特异性产物。可根据具体情况,使用BspQ I等限制酶使模板DNA线性化。
4. 缓冲液中的亚精胺会与核酸形成复合物并可能产生沉淀,因此模板DNA应在加酶之前即倒数第二步再加入反应体系中。
 
■ 使用例(使用CleanCap Reagent AG合成1.9 kb加帽的mRNA)
 
37℃孵育 1-2 小时。
 
*1:如使用修饰NTP,请等量替换对应的NTP。
*2:CleanCap Reagent AG (TriLink公司:Code. N-7113-1/5/10)
 
 

页面更新:2024-06-03 16:05:36

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实验案例

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