Takara

不同IVT反应温度下的mRNA产量、蛋白表达水平比较

实验方法：使用PrimeCap^™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（Code No. 2560A）或T7 RNA Polymerase ver.2.0（Code No. 2541A）和4 mM的CleanCap Reagent AG (TriLink)在不同温度条件下（37、42、47、52℃）进行IVT反应，合成FLuc mRNA，并将合成的mRNA（各200 ng）进行琼脂糖凝胶电泳。此外，将合成的mRNA转染HEK293T细胞，通过FLuc重组测定法测量细胞中的蛋白表达水平。

结果显示，2560A在52℃的温度下仍能保持mRNA的产量，且具有耐热性。虽然合成的mRNA在电泳上没有明显差异，但转染后的蛋白质表达水平会随着温度的升高而下降。
由此结果说明，在超过37℃的IVT反应中，虽然酶持有耐热性，但是会影响细胞内的蛋白质翻译，因此，本产品的IVT反应温度推荐为37℃。