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| ■ 制品内容 |
| Cloned Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (14 U/μl) |
300 U |
| 5X Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Buffer |
1 ml |
| 0.1% × BSA |
1 ml |
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| ■ 制品说明 |
| 本酶催化dNTP聚合于单链或双链DNA的3’-OH末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有3个以上碱基的寡核苷酸。 |
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| ■ 保存 |
| -20℃。 |
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| ■ 起源 |
| E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase |
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| ■ 活性定义 |
| 以DNase处理后的热变性小牛胸腺DNA为起始物，在37℃ 、pH7.2的条件下，1小时内使1 nmol的 [3H]dTTP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。 |
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| ■ 特性 |
1. 分子量：60,000。
2. 最适pH：7.2。
3. 辅因子：二价离子Mg2+，Mn2+或Co2+。
4. 底物特异性：核酸类似物 (如5-甲基-dCTP，6-O-甲基-dGTP等) 可作为底物。
三磷酸双脱氧胸腺嘧啶和三磷酸虫草菌素为终止物。
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| ■ 用途 |
1. 通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2. 使用dNTP、ddNTP来标记DNA的3’末端。
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| ■ 使用注意 |
| 1. 影响反应的因素有：添加的碱基种类 (dATP,dTTP,dCTP,dGTP)，缓冲液中的二价阳离子(Mg2+,Mn2+,Co2+)，DNA末端结构(3’-OH突出末端，平末端，3’-OH凹陷末端)。因此，每个反应都需要摸索最适条件。一般来说，添加dATP和dTTP时，含有Co2+ 的缓冲液是最佳的，而添加dCTP和dGTP时，含有Mn2+ 的缓冲液是最佳的。 |
| 2. 对于长度为15-40 bp的核酸链，如果是3’-OH突出末端，dNTPs与DNA的适合摩尔比是20 : 1，如果是3’-OH凹陷末端，dNTPs与DNA的适合摩尔比是100 : 1。 |
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| * CoCl2 缓冲液 |
| 100 mM |
Sodium cacodylate（pH7.2） |
| 1 mM |
CoCl2 |
| 0.1 mM |
DTT |
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| MnCl2 缓冲液 |
| 100 mM |
Sodium cacodylate（pH7.2） |
| 2 mM |
MnCl2 |
| 0.1 mM |
DTT |
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京公网安备 110114000405号