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产品选择指南

技术服务信息

TaKaRa MutanBEST Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara R401 TaKaRa MutanBEST Kit 20 Rxns ¥1,277
 
■ 制品内容 (20 次量)
Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl) 15 μl
10×Pyrobest Buffer II 200 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 180 μl
10×Blunting Kination Buffer 50 μl
Blunting Kination Enzyme Mix 25 μl
Ligation Solution I* 150 μl
 
* Ligation Solution I 即为Ligation Kit Ver.2.1 的一种组份。
 
 
■ 制品说明
本制品是利用PCR技术进行定点突变操作的试剂盒。其原理是利用导入变异点的引物进行PCR反应后,对PCR产物进行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化处理,再用高效连接试剂Ligation Solution I进行自身连接 (环化反应),然后转化、提取突变体DNA。
本试剂盒的原理十分简单,但Taq酶在PCR过程中的错配率限制了这一技术的应用。现在,Takara的Pyrobest DNA Polymerase使这一技术得到了很好的发挥。Pyrobest DNA Polymerase不仅具有很高的保真性(Fidelity),并且和TaKaRa Taq具有同样的扩增效率。与其他突变试剂盒相比,本试剂盒的特点是操作方便、简单,只需一天时间便可完成整个操作,并且不受载体、宿主菌的限制。
 
保存
-20℃。
 
■ TaKaRa MutanBEST Kit原理
试剂盒原理见下图,全套操作约需5小时,简单说明如下。
1. 设计一对5’端邻接,3’端方向相反的引物用以导入变异点。
2. 进行PCR扩增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。
3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反应 (在同一反应体系内进行,反应只需10分钟)。
4. 自身连接反应 (使用本试剂盒中的DNA高效连接液Ligation Solution I,连接反应只需30 分钟至1小时)。
5. 质粒DNA转化,挑选变异体。
 
 
注意事项
1. 当载体与插入的DNA片段的总长度小于5 kb时,使用本试剂盒较为合适;如果载体与插入DNA 片段长度太长时,不推荐使用本试剂盒。
2. PCR反应后的DNA片段应进行切胶回收纯化,然后再进行自身连接反应,这样可以提高突变成功率。
3. Ligation Solution I请于冰中融解,使用前混匀。应避免多次反复冻融。
4. 连接转化效率低时,请试用下述方法进行改进。
① 确认感受态细胞的转化效率。
② 延长连接反应时间至过夜反应。
 
 

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