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Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR®
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6019 Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR® 20 Rxns ¥901
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
■ 制品内容 (20 次量)
Mighty TA-cloning Kit  
pMD20-T vector (50 ng/μl) 20 μl
Ligation Mighty Mix*1 50 μl × 2
Positive Control Insert*2 10 μl
   
A-overhang mixture  
A-overhang enzyme 10 μl
10 × Buffer 20 μl
dATP 10 μl
   
*1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit (Code No.: 6023) 是同一种试剂。
*2: 3’端带有A碱基约200 bp DNA片段。 (以E.coli基因组DNA为模板,使用TaKaRa Ex Taq进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)
 
 
■ 制品说明
使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应,扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时,与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆,此种方法被称为T-A克隆。Mighty TA-cloning Kit (Code No.: 6028) 是在短时间内快速地将PCR产物进行 T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit,操作简便,可在短时间内高效地进行连接反应。但使用PrimeSTAR系列的α型DNA聚合酶进行PCR反应时,因酶本身具有很强的3’→5’Exonuclease活性,扩增产物几乎都为平滑末端,不能直接进行TA克隆。PrimeSTAR系列DNA聚合酶的PCR产物进行TA克隆时,3’端必须添加“A”碱基。
本试剂盒中含有 (A-overhang mixture),可简单地对PrimeSTAR系列DNA聚合酶的PCR产物3’端添加“A”碱基。A-overhang mixture与MightyTA-cloning Kit 配套使用,是PrimeSTAR系列DNA聚合酶PCR扩增产物的TA克隆专用试剂。
 
保存
-20℃。
 
注意事项
1. Ligation Mighty Mix在冰上融解,轻轻混合后再使用。
2. 克隆时,根据插入片段的长度和方向,有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生,在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时,建议进行菌落PCR确认插入片段。
3. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射,DNA会受到损伤,影响克隆效率。
4. 当PCR扩增用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector;具有Ampr)有同样的选择标记基因时,为防止出现质粒模板自身的转化菌落,建议切胶回收扩增片段后再进行克隆。
 
 

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