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听说很多地方下起了第一场雪，所以这个月的情人节企划比以往时候来的稍晚了一些！ 今天为大家介绍一种常用在酵母杂交实验中的阳性克隆验证方法！ Matchmaker Insert Check PCR Mix 2（Code No. 630497）是2X预混液，可以简便快速地直接以酵母菌落为模板进行PCR扩增。 这种完整的混合液专用于Matchmaker Gold酵母单杂交和双杂交筛选系统，可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。混合液与使用以下载体构建的GAL4 AD文库兼容：pGADT7、 pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2、pGAD424、pACT、 pACT2、pGAD GH、 pGAD GL及pGAD10。 Matchmaker Insert Check PCR Mix 2 包含PCR聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液，仅仅需要将细胞添加到混合液中，然后进行30个循环PCR操作就可以快速验证。 Matchmaker Insert Check PCR Mix 2是完整的混合液。但是若想单独购买引物，也有另外的选择。 Matchmaker AD LD-Insert Screening Amplimer Set（Code No. 630433）结合Advantage 2 PCR polymerase使用，可以从Matchmaker GAL4 激活结构域(AD)载体上扩增插入片段。5'引物可作为测序引物使用。 |
| 实验例：使用菌落PCR快速扩增筛选阳性候选克隆 |
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| 通过Matchmaker Insert Check PCR Mix 2验证随机选择的15个使用Matchmaker Gold系统获得的阳性克隆插入片段（第2-16泳道）。使酵母杂交实验结果得到克隆子序列能够被快速分选以进行下一步分析。 |
| 多款实验关联好物，强烈推荐！ |
| ♦ Matchmaker Gold酵母双杂交系统是深受欢迎的Matchmaker产品线中研究蛋白质—蛋白质相互作用的一款产品。系统中包含新的Y2HGold酵母菌株、更加严密的筛选报告基因、简单易用的文库、高水平表达的载体以及基于SMART技术的文库构建试剂盒。 ♦ Matchmaker Gold酵母单杂交（Y1H）文库筛选系统为鉴定蛋白质-DNA相互作用提供了简便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系统均采用筛选强度较高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素报告基因。这种新型的报告子可以高效杀死非抗性克隆，从而大大降低了背景克隆的生长。 ♦ Normalized Mate and Plate Libraries是高度复杂的cDNA文库，文库克隆到GAL4 AD载体上并转化到酵母菌株Y187中。因为文库扩增和酵母转化操作已经完成，所以使用这些文库进行双杂交筛选更加省时省力。均一化处理降低了文库中高丰度的转录本，低丰度及稀少的cDNA得以富集，这样的文库更加具有基因代表性，也使筛选操作更加简单，并大大降低了在筛选文库时获得假阳性的可能性。 ♦ Make Your Own Mate & Plate Library System可以用于自制文库。利用该系统，一周之内即可构建足够用于数百次酵母双杂交筛选实验的所需文库。文库构建是在Y187文库酵母菌株中通过酵母高效的同源重组机制直接完成的，无需进行传统文库构建过程中的一些繁冗的操作 (比如文库克隆、扩增和大肠杆菌收集等)。 |
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页面更新：2023-11-20 15:23:42
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