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机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

均一化Mate & Plate文库
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 630479 Mate & Plate Library - HeLa S3 (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630486 Mate & Plate Library - Human Brain (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630488 Mate & Plate Library - Mouse Brain (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630484 Mate & Plate Library - Mouse Embryonic Stem Cell (Normalized) 5×1 ml ¥15,420
Clontech 630487 Mate & Plate Library - Universal Arabidopsis (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630485 Mate & Plate Library - Universal Drosophila (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630480 Mate & Plate Library - Universal Human (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
Clontech 630481 Mate & Plate Library - Universal Human (Normalized) 2×1 ml ¥7,608
Clontech 630483 Mate & Plate Library - Universal Mouse (Normalized) 5×1 ml ¥15,335
无标题文档
 
 
    文库构建        
双杂诱饵 酵母双杂文库构建系统 单缺培养基L  
    预制文库        
    均一化预制文库   YPDA培养基    
             
    Mate & Plate文库 酵母双杂筛选
           
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    宝生物文库构建服务        
 
 
均一化的酵母双杂交cDNA文库——Normalized Mate & Plate
■ 制品说明
Normalized Mate and Plate Libraries是高度复杂的cDNA文库,文库克隆到GAL4 AD载体上并转化到酵母菌株Y187中。因为文库扩增和酵母转化操作已经完成,所以使用这些文库进行双杂交筛选更加省时省力。均一化处理降低了文库中高丰度的转录本,低丰度及稀少的cDNA得以富集,这样的文库更加具有基因代表性,也使筛选操作更加简单,并大大降低了在筛选文库时获得假阳性的可能性。
· 操作仅需三步:
1. 用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System构建表达目的蛋白质的酵母菌株。
2. 将bait菌株与1 ml均一化文库混合过夜培养。
3. 铺板于筛选培养基上。
· 什么是均一化文库?
均一化处理降低了cDNA文库中高丰度转录本所占的比例,这意味着许多管家基因的拷贝数显著降低,所以筛选的克隆数更少,并且可以确保筛选到包含中等丰富和低等丰度转录本的克隆。简而言之,您可以花费较少的精力筛选到更多的独立克隆,并有更大的机会检测到重要的互作。
· 如何制备均一化文库?
首先用SMART技术扩增获得cDNA,之后用双链特异性核酸酶(DSN)进行均一化处理(1,2)。简单来说,cDNA经变性及退火后,用特异切割双链DNA的酶快速酶切,因为cDNAs丰度越高退火越快,越有可能被酶降解。最后,用Northern blot方法分析cDNA均一化效率,将均一化的cDNA文库克隆到prey载体pGADT7-RecAB上。
· 通用型文库提供通用型基因覆盖范围
人和小鼠通用型文库提供了广泛且完善的表达基因覆盖范围。这些均一化通用型文库来自于不同的齐全组织,这些特异挑选的组织能够代表广阔范围内表达的基因(2)。结合“全面的”基因代表性及低拷贝cDNAs的富集度,Mate & Plate Universal (Normalized) Libraries为鉴定新的真实的互作提供了更大的可能。
· 为什么使用均一化通用型文库?
事实上,许多有意义的互作发生在位置适宜但表达较弱的蛋白质之间,这类互作用传统的单一组织文库不容易检测到。通用型且均一化的文库为这个问题提供了有效的解决方法,因为这些文库代表了平衡的转录本,能够更大范围的覆盖表达的基因。因此,筛选不再局限于仅能鉴定出单一组织中高水平表达的蛋白质之间的互作。
 
■ 制品特点
1. 为蛋白质互作中的文库筛选提供简便方法。
2. 筛选更少的克隆,检测更多的互作。
3. 通用型文库——更高的基因代表性。
4. 筛选不再大海捞针。
 
■ 制品用途
1. 酵母双杂交文库筛选。
 
■ 文献
1. Zhulidov, P. A. et al. (2004) Nucleic Acids Res32(3):e37.
2. Shagin, D. A. et al. (2002) Genome Res12(12):1953-1942.
 
 
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页面更新:2019-12-29 14:53:47