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上新啦,SARS-CoV-2假病毒包装系统!
 
在2019年起始的这场新型冠状病毒感染的肺炎疫情中,生命科学和生物医药领域的多个团队迅速投身于疫情防控和诊断治疗中,在病毒溯源、传播途径、快速检测方法和试剂、重症病人治疗方案优化、疫苗快速研发等领域贡献了智慧和力量。Takara Bio为研究新型冠状病毒的科研人员和IVD企业提供解决方案,提供高效的检测、纯化、测序、克隆、基因组编辑和免疫分析。

2019新冠病毒被命名为SARS-CoV-2,新冠肺炎被命名为是COVID-19。在开发COVID-19疗法的过程中,其中一个常见步骤就是要证明该疗法对SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。然而处理真正的SARS-CoV-2病毒需要更为严苛的安全条件,生物安全防护水平为3级,这比处理慢病毒的生物安全防护水平还要高一级。基于安全措施考虑,目前研究人员大多使用带有SARS-CoV-2刺突蛋白(spike protein)的假病毒(Ni et al. 2020, Shang et al. 2020)替代SARS-CoV-2病毒开展COVID-19疗法相关研究。

SARS-CoV-2假病毒目前已被应用于新冠疫苗开发研究。为了确保疫苗的有效性,使用SARS-CoV-2假病毒开展中和试验,以确定接种受试者的抗血清是否能抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。除了疫苗开发之外,SARS-CoV-2假病毒也被用于抗体药物开发研究中:通过中和试验,验证候选抗体是否可以抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。当然,也可以用于基础研究,比如可以用于比较SARS-CoV-2和SARS-CoV病毒刺突蛋白的功能。
 
 
—————— SARS-CoV-2假病毒包装系统 ——————
关于SARS-CoV-2假病毒的包装制备,目前主要是借助现有的慢病毒包装系统,优化改进后用于包装制备SARS-CoV-2假病毒。根据科学家们的研究,新冠病毒主要依靠病毒表面的刺突蛋白,也就是S蛋白,通过与人体细胞表面受体ACE2的结合入侵人体,所以我们把慢病毒包装系统中的包膜蛋白表达载体替换成为S蛋白表达载体,包装制备出包膜蛋白为S蛋白的SARS-CoV-2假慢病毒,替代SARS-CoV-2病毒开展研究。

Takara新推出的SARS-CoV-2假病毒包装系统很有技术亮点。它由5个独立组件组成,并且5个组件按照特定的优化比例混合,提高了病毒包装性能。在这个包装系统中,gagpolenv基因被分离开来,可以进一步降低RCL(复制型慢病毒)产生的概率。事实上,有文献报道,使用这种方法并没有检测到RCL(复制型慢病毒)的出现(Wu et al., 2000)。这些改进显著提高了这款包装系统的生物安全性。在病毒滴度方面,pol基因与vpr基因的融合可以确保反转录酶/整合酶蛋白质能够转运到重组慢病毒粒子中,从而确保每病毒粒子中包含更多的反转录酶和整合酶,确保更高的转导效率和整合效率。在这个包装系统中,还包含了Tet-Off和tat反式激活因子,可以驱动病毒必需成分高水平表达,产生诱导级联表达反应,从而可以制备出高滴度SARS-CoV-2假病毒。而在第三代慢病毒包装系统中,通常gagpol序列是不分离的,也没有使用反式激活级联机制。应用数据显示,转导ACE2-HEK293T细胞所产生的功能滴度可达到为107-108 IFU/ml。

为了方便使用,这款包装系统打破了传统形式,采用了预混的冻干粉形式。将慢病毒包装质粒和转染试剂预混后进行预分装和冻干处理,所以不再额外需要添加转染试剂。对于研究人员来说,操作非常简便,一管一个反应,只需要一步操作流程:那就是只需加入您选择的慢病毒表达质粒就可以了。这种包装形式还可以在很大程度上降低操作误差,确保不同样品和批次间的一致性。
 
 
—————— 完善的后续配套支持 ——————
基于ELISA的滴度测定方法
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit适用于检测基于HIV-1慢病毒载体的上清液滴度。该试剂盒可以特异性检测p24衣壳蛋白质,通过与p24标准品制作的标准曲线相比较,就可以获得检测样品的病毒滴度。
 
基于qRT-PCR方法的滴度测定方法
Lenti-X qRT-PCR Titration Kit该试剂盒通过qRT-PCR方法检测上清液中的病毒基因组拷贝数,快速测定慢病毒滴度。将样品和试剂盒中提供的标准品RNA进行梯度稀释,然后分别进行qRT-PCR反应后绘制曲线。通过与标准曲线的Ct值比较,就可以获得样品所包含的病毒拷贝数。
 
10分钟智能化滴度测定方法
Lenti-X GoStix plus作为一种智能化检测手段,将慢病毒验毒棒和一款简便的手机APP相结合使用,通过检测慢病毒p24蛋白质可快速定量测定慢病毒滴度,而且检测样品仅需20 μl,更节约样品用量。
 
方便使用的转导滴度测定方法
Lenti-X Provirus Quantitation Kit采用qPCR方法快速测定转导后的靶细胞中整合的慢病毒的拷贝数(前病毒)。通过测定靶细胞中前病毒的拷贝数,可以确定有效的慢病毒转导滴度,从而更加有效地感染靶细胞。
 
简便快速高效的浓缩方法
如果检测后病毒滴度偏低,需要浓缩后再转导靶标细胞,以提高实验成功率。超速离心方法是常规使用的慢病毒浓缩方法,但这种方法受限于设备、时间和任务量等因素。Lenti-X Concentrator是一款无需超速离心操作的浓缩试剂,可简单、快速、高效地浓缩慢病毒上清液,浓缩过程大约1小时可完成,浓缩倍数可高达100倍,回收率高达90%。整个操作流程非常简单,浓缩规模可按照需求扩大或者缩小,而不受病毒量、病毒滴度和需要浓缩的起始体积的限制。
 
基于重力流的纯化方法
Lenti-X Maxi Purification Kit可从病毒上清液中纯化出高产量、高纯度的慢病毒。这种基于重力流的纯化系统,操作简单、快速、高效,且纯化效果优于基于注射器的纯化系统,因为后者会损伤脆弱的病毒颗粒并降低产量。整个操作过程就像纯化质粒一样简单。
 
 

页面更新:2021-04-30 15:43:23