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技术服务信息

整合的慢病毒拷贝数测定
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631239 Lenti-X Provirus Quantitation Kit 200 Rxns ¥6,511
无标题文档
 
 
慢病毒包装系统 293T包装细胞 慢病毒滴度测定 慢病毒浓缩 慢病毒纯化 转导增强 整合位点检测
 
 
Lenti-X Provirus Quantitation Kit可以让您快速确定转导细胞混合或克隆群体中存在的整合慢病毒(前病毒)的拷贝数。该试剂盒包括用于测定前病毒拷贝数的引物、基因组DNA纯化试剂盒、制备标准曲线的对照DNA,以及基于TB Green检测的qPCR试剂(可检测200次)。
 
正确确定慢病毒的有效滴度
通过量化已整合到靶细胞核DNA中的慢病毒的数量,您可以正确确定慢病毒上清液原液的真实滴度(即有效滴度)。利用这个信息,可以用正确的MOI(感染复数)去感染细胞,让您能够预测将有多少病毒基因组会整合到细胞中。您也可以使用此方法来校准其他滴定方法,那些方法可以测量包装细胞上清液中的病毒含量,但不能测定靶细胞中的功能性整合滴度。
 
一致并且可预测的慢病毒转基因表达
当使用慢病毒载体将基因导入至靶细胞时,表达水平会随着MOI的增加而增加,因为更多的慢病毒拷贝会整合到细胞核DNA中。同样,对于给定的病毒制剂,在不同目标细胞系中的有效MOI可能会因各个细胞系对慢病毒感染的敏感度不同而不同。Lenti-X Provirus Quantitation Kit可让您评估任何细胞系中的转导结果,而不受表达水平的影响,并且可确保不同细胞系间或使用不同病毒制剂间转导水平一致。
 
概述/特点
· 预测不同实验间一致的转基因表达水平
· 比较多个细胞系的转导数据
· 确保不同实验或不同细胞系之间的拷贝数一致
· 包含纯化10种基因组DNA和进行200 次TB Green qPCR反应试剂*
* 此试剂盒中包含的引物旨在扩增HIV-1基因组包装信号附近的的保守区域。这些引物与Takara Bio销售的所有慢病毒载体和常用的慢病毒载体相兼容。如果不能确定该试剂盒是否与您的载体相兼容,请将您的载体序列发送至service@takarabiomed.com.cn,我们的技术支持团队将很乐意为您确认引物的兼容性。
 
实验例
图1. 测定靶细胞中整合的慢病毒拷贝数。使用快速qPCR方法确定前病毒含量。
 
图2. 慢病毒前病毒拷贝数会影响转导细胞中转基因的表达水平。使用AcGFP1慢病毒表达载体分别以高或低MOI感染HT1080细胞。感染后72小时,对细胞进行嘌呤霉素药物选择。一周后,选择稳定转导的细胞克隆进行扩增和表达分析。使用流式细胞术确定AcGFP1的表达水平,并使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit确定基因组DNA中的前病毒含量。该图所示数据为低拷贝数(> 3; n = 8)和高拷贝数(> 9; n = 7)实验组两组合并数据。结果表明,前病毒含量越高,表达水平也就越高。
 
图3. 等量病毒感染细胞时,不同类型细胞获得的前病毒(整合的慢病毒)拷贝数不同。 用等量的单一慢病毒原液(100 μl)感染HT1080、HeLa和HEK 293细胞。感染后72小时,使用嘌呤霉素对细胞进行药物选择。一周后,使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit确定稳定转导细胞群的前病毒拷贝数
 
 
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