ThruPLEX DNA-Seq Kit是更快速和灵敏度更高的文库制备试剂盒。整个操作包含end-repair，ligation，amplification 3步反应，且在单管中进行反应。
· Input DNA量：50 pg～50 ng
· 纯化步骤：中间不需要（仅文库扩增后）
· 文库制备步骤数：3
· 文库制备的时间：2h
· sample转管次数：0
可以。ThruPLEX DNA-Seq Kit对于GC Rich的区域也能实现均一覆盖。
不可以。ThruPLEX DNA-Seq Kit必须使用双链DNA。
需要。DNA长度＞1 kb时，使用ThruPLEX DNA-Seq Kit前需进行片段化。
DNA片段化可以使用物理方法（Covaris、Bioruptor等）或酶切方法（DNA Fragmentation Kit等）的方法。
在50-130 μl 的TE 或Low-TE缓冲液中加入2-50 ng DNA即可成功完成片段化过程。使用更少量DNA时，可以参考“Low-volume DNA shearing for ThruPLEX library prep”。
Covaris的推荐条件需要根据所需片段大小进行设定。详细请参考Covaris网页内容。
可以使用将gDNA随机片段化的DNA Fragmentation Kit（Code No. 6137）。使用方法请参考DNA Fragmentation Kit的说明书。
ThruPLEX DNA-Seq Kit设计用于以50 pg～50 ng DNA起始的扩增。 起始量取决于所需的多样性水平和用途。
是的。需要另购Indexing kit。Indexing kit以tube或microplate方式提供，含有对应Illumina公司NGS用index序列形成的扩增引物，用于ThruPLEX DNA-Seq文库扩增。
关于文库扩增适宜PCR循环数的选择，请参考ThruPLEX DNA-Seq Kit的操作说明书。
可以。ThruPLEX DNA-Seq Kit在没有Real Time PCR仪时也可以使用。适宜PCR循环数请参考ThruPLEX DNA-Seq Kit说明书，根据使用的DNA起始量进行选择。
可以。 ThruPLEX DNA-Seq文库，4℃最多保存6小时或-20℃最多保存7天后，不需要添加试剂可再进行追加扩增。关于文库处理流程，追加循环数的顺序及流程请参考ThruPLEX DNA-Seq Kit说明书。
不可以
预期产量为100 ng～1 μg。文库的产量随样品的种类、片段大小、使用的Thermal cycler等不同而不同。Covaris片段化后平均大小为200 bp的reference DNA，按照推荐的循环数扩增后，一般产量为300 ng～700 ng。
不需要。仅在测序前对单个或pooling之后的文库进行定量。文库扩增后，如果要进行文库定量需要增加AMPure XP纯化步骤，增加纯化操作可能会造成DNA损失，因此建议只对测序前的纯化文库进行定量。
是的。建议Beads：Sample比例为1：1。所有清洗步骤用到的80%乙醇需要现用现配。详细说明请参考ThruPLEX DNA-Seq Kit操作说明书。
ThruPLEX DNA-Seq Kit制备的文库，适用于所有Illumina平台，包括HiSeq®, MiSeq®, NextSeq® 500, GAIIx™, NovaSeq™，和MiniSeq™。
Flow cell中添加的样品浓度，请参照Illumina的推荐值。使用Illumina MiSeq® v3测序时，推荐添加14～15 pM的ThruPLEX DNA-Seq文库。
不需要特殊的操作。ThruPLEX DNA-Seq文库的处理方法与TruSeq Nano DNA HT Sample Prep kit等Illumina文库制备试剂盒是相同的。
请参考Illumina公司的PhiX使用方法。对于多样性低的文库或者测序会遇到问题的文库，可能需要增加PhiX浓度。请参阅ThruPLEX DNA-Seq Kit说明书了解更多的测序建议。
页面更新：2020-04-15 15:14:48
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