| Takara小鼠BCR建库产品助力开发新型的HIV疫苗的研究 | ||||||||||
| 艾滋病是一种危害性较大的传染病。虽然国内外专家在抗艾的路上取得了卓越的成绩，但是开发安全有效的艾滋病毒疫苗仍然是一项重大的科学挑战。筛选有前景的HIV候选疫苗需要对它们引发的免疫反应有一个全面的了解，而这只能通过免疫组库测序对T细胞和B细胞进行动态监测才能充分揭示。 在一项研究中，2023年诺贝尔奖得主Drew Weissman研究团队以及其他科研单位的科学家成功递送了包裹在脂质纳米颗粒(LNPs)内的编码HIV包膜(Env)三聚体蛋白的mRNA。在小鼠模型中，HIV mRNA-LNPs表达的抗原Env诱导B细胞克隆的扩增，并刺激多种艾滋病病毒抗体的免疫应答，广谱中和抗体(bnAbs)的分泌也证明了这一点。相关研究成果发表在《Cell Reports》期刊上，题为“mRNA-encoded HIV-1 Env trimer ferritin nanoparticles induce monoclonal antibodies that neutralize heterologous HIV-1 isolates in mice”。 其中，Takara Bio的免疫组库分析试剂盒SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit用于制备小鼠抗体重链和轻链的可变区测序文库(下面流程图)，研究人员在BCR位点内发现了一些关键突变，这些突变揭示了扩增的B细胞克隆作为分泌的tier 2 bnAbs的前体，这对于广谱病毒中和非常重要。 而且，本研究还证明了这些关键突变诱导的单克隆抗体可以中和异源HIV-1分离株。虽然大规模制造复杂的纳米颗粒蛋白免疫原或许面临着巨大的现实和资金挑战。但是倍感鼓舞的是，本研究提供了一种开发HIV- mRNA-LNP疫苗的有潜力的策略。很高兴在这项研究中，Takara Bio的Immune profiling为破译mRNA-LNP疫苗反应的基础免疫学做出了重要贡献。 |
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| 文献中使用的小鼠BCR建库试剂盒SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit基于5’RACE和NGS技术，提供了一种灵敏，准确，优化的BCR库分析方法。虽然采用多重PCR可以在一个反应中对多个BCR基因进行扩增，但也被证明在对特定序列进行扩增时存在灵敏度，特异性和偏差的问题，这些都可能带来同种型的鉴别困难。而5’RACE方法减少了变异性并且可以从BCR重链或轻链的恒定区引发扩增。试剂盒将这些优点与基因特异性扩增相结合可以捕获BCR完整V(D)J可变区，提供了一种高灵敏度、可重复的B细胞库分析方法。在大部分情况下，通过H/K/L链的下游测序分析可以准确鉴别克隆型，可靠确定同种型。 Takara Bio一直致力于为我们客户提供创新的、高品质的产品。近期，我们改进了本研究中使用的BCR试剂盒，发布了新的SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)： 升级点1：自带BUFF，添加分子条形码（UMI） 可以消除PCR错误或duplication以及测序偏向，从而确保获得更准确和可靠的结果！ 升级点2：操作流程更方便 试剂盒中的重、轻免疫球蛋白链引物以及酶均是预混形式，减少了试剂组分数量和操作步骤！ 升级点3：样本类型兼容性更友好 支持不同起始量的RNA（RIN>7）起始，均可获得高品质的测序文库。比如小鼠脾脏、骨髓或者外周血单核细胞（PBMC）纯化的10 ng-1 μg的总RNA，也支持从小鼠血液或者淋巴结中提取的RNA样本。 升级点4：测序平台选择更灵活 该试剂盒所建文库支持更多样的测序平台。既支持Miseq平台（分析V(D)J全长信息），也支持其它Illumina平台，只分析CDR3区。 |
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| 产品实验例 | ||||||||||
| ● SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)可以对稀有克隆型进行准确地检测 Takara科学家向10 ng 小鼠脾脏 RNA样本中掺入不同起始量的（100pg、10pg和1pg RNA）的10E8杂交瘤细胞系来源的RNA。使用SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)制备BCR文库，并在Illumina NextSeq上测序。测序reads downsample至3M reads。 |
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| ● SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)有更高的灵敏度 为了比较SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)与其他同类试剂盒的性能，使用10 ng小鼠脾脏RNA制备BCR文库。N公司试剂盒测序reads downsample至1M reads。SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)的测序reads downsample至0.5M reads。结果显示，相同测序深度下，SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)检测到的BCR克隆型比N公司试剂盒多4倍，拥有更高的灵敏度。 |
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| ■ 产品信息 | ||||||||||
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页面更新：2024-04-10 09:47:49
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