| 使用简便、备受好评的腺病毒基因导入系统推荐 | ||||||||||||
| 腺病毒基因转移是将基因导入哺乳动物细胞的最可靠方法之一，已经在基因治疗、新冠疫苗、流感疫苗研发中有所应用。因为腺病毒的感染不是细胞周期依赖性的，你可以将你的基因传递到原代和转化的细胞系。腺病毒是哺乳动物细胞中蛋白质生产的理想工具，因为在感染后，靶基因会以非常高的水平瞬时表达，因为许多细胞都会接受重组基因组的多个拷贝。此外，腺病毒能够感染来自许多不同动物物种的各种增殖和静止细胞类型，包括人类、非人灵长类动物、猪、啮齿动物 、小鼠和兔子。 |
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| Takara腺病毒基因导入系统，使用快速简便、备受好评。 |
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| 强大的腺病毒载体系统，省去穿梭质粒更快捷 |
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| 使用强大克隆技术，省去穿梭质粒，简化了重组腺病毒载体克隆步骤，加快了克隆速度。本系统基于人源5型腺病毒（Ad5）改造而成。由于腺病毒载体较大（～34 kb），克隆难度较高，目前大多数腺病毒载体系统需要借助穿梭质粒，使用复杂的克隆程序来克服克隆困难这一问题。Adeno-X Adenoviral System 3利用强大的In-Fusion HD克隆技术，不需要借助穿梭质粒就可以将目的基因直接克隆至腺病毒载体中，就像常规质粒构建一样简单快速。重要的是，将其它系统至少8天的克隆时间缩短至2-3天，同时确保克隆效率>90%。
另外，也可以提供四环素诱导表达型、无启动子通用型等重组腺病毒载体系统，适用于多种研究需求。
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| 腺病毒滴度测定多样方案，适应不同场景下多重选择 |
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| ♦ 简便准确的酶联免疫分析法 | ||||||||||||
| 这是一种功能滴度测定方法，基于腺病毒六邻体蛋白质进行测定。Adeno-X Rapid Titer Kit这款试剂盒中包含一种六邻体蛋白质特异性抗体，用于标记感染细胞。六邻体蛋白质由腺病毒基因组编码，是腺病毒衣壳的重要组成部分，为腺病毒复制所需要，但是它的表达需要依赖于E1基因产物。因此，像HEK 293这样的E1基因反式互补细胞类型，可以用来测定腺病毒感染活性，原因是只有细胞被感染才能表达六邻体蛋白质。这种快速测定方法需要先花费1-2小时建立体系，两天后再花费大约3小时对细胞进行标记、染色和计数。每个染色细胞对应一个感染单位。这种检测方法可与1型、2型、5型和6型人腺病毒相兼容。 我们已经对基于5型人腺病毒的Adeno-X病毒进行了验证，Adeno-X病毒由Takara Adeno-X腺病毒载体系统所制备。 |
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| ♦ 易用高效的荧光定量PCR法 | ||||||||||||
| 这是一种使用定量PCR技术测定腺病毒滴度的方法，快速、简单、高效。Adeno-X qPCR Titration Kit可以用于检测所有Ad5-based腺病毒载体，当然也可以检测使用Takara Adeno-X腺病毒载体系统所制备的重组腺病毒。结合使用了qPCR和TB Green chemistry，这样就可以依据校准的DNA标准曲线来确定腺病毒制剂（如粗裂解液或纯化病毒粒子）中的病毒基因组拷贝数。这种测定方法只需要大约4小时就可得出检测结果，而由于qPCR滴定花费时间短，所以实验人员在收获病毒的同一天，就可以使用经过准确滴定的病毒去感染目标细胞。 |
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| ♦ 方便快速的GoStix检测法 | ||||||||||||
| 这是一种即时灵敏 (～10 min)的腺病毒滴度测定方法，让您可以迅速判断出腺病毒是否制备完毕以做好使用准备，也是确定扩增后收获病毒最佳时间的理想选择。Adeno-X GoStix只需要将20 μl培养液上清添加至GoStix检测板上样孔中，随后滴加4滴缓冲液，等待2-20分钟，检测板上的检测窗口会出现一条带。在上清液中检测到的腺病毒数量与细胞内产生的腺病毒是密切相关的。每次测试都可以保证足够高的灵敏度，使用少量病毒上清液就可以进行检测，也可以用于确保在腺病毒扩增过程中获得尽可能大的病毒收量（我们使用这些检测板来确定从感染细胞中收获病毒的最佳时间）。感染HEK293细胞后，每天只需要取20 μl上清液进行检测。检测窗口出现一条颜色很深的Test条带，可以确保在产毒高峰时期收获高滴度的腺病毒。 |
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| 腺病毒滴度测定多样方案，适应不同场景下多重选择 |
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| 想要简便快速地纯化腺病毒，可以选择基于色谱的腺病毒纯化系统。Takara开发的这种基于色谱的腺病毒纯化方法，可以在1.5小时内从感染细胞中纯化扩增后的腺病毒。 整个操作流程没有超速离心步骤，而是使用了一种特别的选择性结合腺病毒粒子的膜来进行色谱纯化。将纯化膜装在一个小型的一次性滤芯中，可安全安装在标准尺寸的Luer-Lok注射器上。为了方便使用，注射器和过滤器组件都是预组装好的，随时可以使用。在过滤器和注射器之间还装配了一个单向阀，省去了纯化和洗涤过程中拆装注射器的麻烦。含有腺病毒的培养液通过连接到单向阀的管子吸入注射器，然后通过推出过滤器进行纯化。当含有病毒的培养液通过过滤器时，腺病毒粒子会吸附在膜上，将其从溶液中有效地分离出来。然后对结合在膜上病毒粒子进行洗涤和洗脱就可以获得高度纯化的病毒粒子。 这种纯化方法纯化的病毒滴度和纯度，与CsCl密度梯度离心法所获得的效果是相当的，病毒粒子和感染单位比可低至20:1。与CsCl密度梯度离心法不同的是，这种方法安全有效，不需要经过严格的培训，也不需要昂贵的设备，只需要简单操作就可以稳定获得高产量的纯化腺病毒。 对于大量病毒纯化，我们还贴心准备了大容量工具包。在这个工具包中，提供了注射泵来驱动澄清的裂解产物通过三层过滤器。在结合、洗涤和洗脱过程中，注射泵恒定的压力和流速非常有助于病毒回收。 |
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| Takara Bio作为重要的生物技术企业，在病毒基因导入系统方面造诣颇深、体系完备，拥有慢病毒系统、逆转录病毒系统、腺相关病毒系统、腺病毒全套解决方案，为相关生物学基础研究提供强力支持，为寄予厚望的细胞与基因治疗研究护航加码。 |
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| 点击下方图片下载《基因导入实验操作手册》！基因导入方法及其特点、主要基因导入方法的原理、主要病毒载体特征、病毒载体选择指南，众多干货知识尽在其中。（文件大小：5.71 MB） |
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页面更新：2023-10-24 12:51:55
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