| Cellartis®干细胞研究用系列产品介绍之 DEF-CS：单个干细胞基因操作实验的理想选择 |
| 1. 单个干细胞基因操作的必要性 |
| TALEN和Crispr-Cas9这些新方法的出现，使得对于细胞某个核酸区域可以进行相当准确的靶向攻击。但是，到目前为止，这些方法还不能做到把目标核酸位点进行剧本式的改造。通常，都是在基因操作后，对于得到的细胞进行目标核酸测序，寄希望于在这些候选的克隆中（clones）筛选得到理想的基因改造结果。 设想一个例子，假设某研究团队想研究某个调控基因的启动子区域是如何参与基因调控的。他们利用Crispr-Cas9定点地攻击这个目标启动子。根据Crispr-Cas9的特点，在某一次这种定点攻击后，核酸伤口（DNA lesion）通过修复机制可以愈合，而愈合的过程会造成许多不同的后果，可能是增加了新的碱基，可能是减少了碱基，可能是碱基替换。对于研究团队来讲，他们希望获得尽可能多样化的愈合结果，这样才能在后期的分析中，获得在启动子中哪个或是哪些碱基是起作用的。 |
| 2. 单个干细胞基因操作的困难 |
| 目前，单个干细胞基因操作存在的巨大挑战发生在基因操作后的细胞恢复过程。干细胞在基因操作过程中，需要经历几个如转染、电击等破坏性过程，这对细胞活性是个挑战。更为重要的是，目前市面上主流的干细胞培养基里面，干细胞是贴壁、成集落式的生长。这就是说，一般地，干细胞的生长是一个群体性过程，细胞和细胞之间的交互是个重要的因素。那么，在干细胞进行基因操作后，需要以单细胞悬液和单细胞铺板的形式进行细胞恢复，这会对于干细胞的恢复生长造成非常大的负面影响。 因此，DEF-CS是单个干细胞基因操作的理想选择。和目前市场上知名的Life Technologies和STEMCELL Technologies 的相关产品不同的是，DEF-CS在设计上就是支持单细胞生长的，如下图所示，干细胞在DEF-CS培养基里的生长方式是贴壁、单细胞平层生长；而在mTeSR 1培养基 (STEMCELL Technologies)和 Essential 8培养基 (E8; Life Technologies)中，细胞是贴壁、成聚落（即非单细胞平层）式生长。 |
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| *实验结果来源于clontech网站 |
| http://www.clontech.com/CN/Products/Stem_Cell_Research/Culture_and_Cryopreservation/xxclt_ displayImage.jsp?img CntId=109300&sitex=10022:22372:US |
| 3. 在维持单个干细胞活性方面，DEF-CS有显著优势 |
| 下图展示的实验结果说明，DEF-CS在维持单个细胞的恢复性生长方面有质的优势。图中横坐标轴代表加到培养孔（well）中干细胞悬液内所包含的干细胞数，依次是444.4个/well, 148.1个/well, 49.4个/well, 16.5个/well, 5.5个/well, 1.8个/well, 1.0个/well, 0.5个/well；纵坐标代表每个孔中经过细胞恢复后，形成了健康的贴壁生长细胞的百分比。在悬液包含444.4个/well的情况时，假如一共添加了100个well, 其中全部的well中出现了健康的细胞恢复生长，形成的有效克隆率是100%；当悬液中的细胞含量大于1.8个/well时，DEF-CS与Vendor1相比，形成的有效克隆率基本一致，但是，当悬液中的细胞数为1个或0.5个时，DEF-CS的效率明显高于其他的竞争产品。这说明，DEF-CS在维持单个干细胞的活性方面，与目前市面上的产品比起来，有显著优势。 |
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| *实验结果来源于clontech网站 |
| http://www.clontech.com/US/Products/Stem_Cell_Research/Resources/Technical_Notes/DEF-CS_Single-Cell_Cloning |
| 4. 采用DEF-CS进行单个干细胞传代操作后，干细胞全能性保持上有显著优势 |
| 做单个干细胞基因操作的研究人员，除了关心单个干细胞的存活率以外，还需确保存活下来的单个干细胞仍然保留着发育全能性。 下面的实验结果说明，DEF-CS培养体系在这点上，具有很大优势。下图是流式细胞仪的测试结果，人类诱导多能干细胞株chiPSC22分别使用DEF-CS，vendor1，vendor2培养基，进行单个细胞恢复实验（即悬液中只包含1个干细胞），挑选出五个可以恢复生长的克隆来。对于每个恢复的克隆，用两种标记干细胞全能性的特异性抗体同时进行检测，第一种是TRA-1-60(蓝色)，第二种是SSEA-4（粉色），绿色表示可同时检测出这两种抗体。观察chiPSC22的生长情况，发现vendor2产品培养体系中挑选不到恢复的克隆，而在DEF-CS培养体系中挑出的5个克隆，双标记同时检测出的都接近100%，细胞性表现良好的全能性；vendor1产品培养体系中挑出了5个克隆，而阳性率最高达到50%，由此能说明DEF-CS培养体系中恢复的单个干细胞克隆，可以很好地保持干细胞的全能性。 |
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| *实验结果来源于clontech网站 |
| http://www.clontech.com/US/Products/Stem_Cell_Research/Resources/Technical_Notes/DEF-CS_Single-Cell_Cloning |
| RHB-A产品信息： |
| https://www.takarabiomed.com.cn/ProductShow.aspx?from=m&m=20160307140053500605&productID=20160307150054903637 |
| DEF-CS产品信息： |
| https://www.takarabiomed.com.cn/ProductShow.aspx?from=m&m=20160307140053500605&productID=20160307140359660608 |
页面更新：2017-04-14 14:05:23
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