Takara

FLuc蛋白的无细胞表达 vs 细胞表达

■ 实验方法

·4种不同的3’UTR，分别插入到FLuc基因的下游，制备mRNA合成用的模板DNA
·4种不同的3’UTR分别是：①人的α-globin；②人的β-globin；③AES基因；④肝炎病毒的WPRE
·使用Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit (Code No. 6144) 和CleanCap AG (3’OMe) (TriLink公司) 制备加帽mRNA。
·向3288无细胞表达体系中添加2 μg加帽FLuc mRNA，在27°C下培养2小时。
·向HEK293T细胞和HeLa S3细胞中转染0.5 μg各加帽mRNA，培养24小时。
·检测3288无细胞表达系统和细胞表达的FLuc蛋白活性。

结果显示，在无细胞表达系统和细胞表达系统的比较中，FLuc蛋白的表达活性水平有很高的相关性(HEK293T:R²=0.87；HeLa S3:R²=0.70)。
这表明，mRNA无细胞表达系统可以成为评估和筛选mRNA构建体的简单且迅速的手段。 。