灵敏度和模板添加量比较

 
(1)cDNA
 
按各公司推荐的PCR反应条件,对10 ng -1 μg total RNA反转录获得的cDNA进行灵敏度和模板添加量的比较。
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase Ver.2(Code No. R047A)在延伸时间为5 sec/kb或10 sec/kb的快速反应中,total RNA的扩增效果良好(相当于10 ng-1 μg模板cDNA)。
 
目的基因:TFR 4 kb(50 μl反应体系)
 
  0. H2O 4. 100 ng 7. 600 ng
  1. 10 ng 5. 200 ng 8. 800 ng
  2. 20 ng 6. 400 ng 9. 1 μg
  3. 50 ng    
 
(Takara Bio Inc.比较结果)
 
反应条件:按各公司推荐的PCR反应条件实验
PCR仪:使用Clontech PCR Thermal Cycler GP (Code No. WN400)
 
(2)人基因组DNA
 
以人基因组DNA(0.1 ng-1 μg)为模板,在各公司推荐的PCR条件下对扩增DCLRE1A基因(4 kb)的灵敏度和模板添加量进行比较。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase Ver.2(Code No. R047A),以人基因组DNA(10 ng-600 ng)为模板进行PCR反应。在延伸时间为5 sec/kb的反应中,对10 ng-600 ng的人基因组DNA有良好的扩增结果。另外,在延伸时间为10 sec/kb的反应中,对10 ng-1 μg的人基因组DNA有良好的扩增结果。
 
目的基因:DCLRE1A 4 kb(50 μl反应体系)
 
  0. H2O 4. 100 ng 7. 600 ng
  1. 0.1 ng 5. 200 ng 8. 800 ng
  2. 1 ng 6. 400 ng 9. 1 μg
  3. 10 ng    
 
(Takara Bio Inc.比较结果)
 
反应条件:按各公司推荐的PCR反应条件实验
PCR仪:使用Clontech PCR Thermal Cycler GP (Code No. WN400)