Takara

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实验例1-不同情况下mRNA合成产量的比较

实验方法：以萤火虫荧光素酶（FLuc） mRNA 编码的 DNA（Takara IVTpro T7 mRNA合成试剂盒（Code No. 6144）的组分中的阳性对照（FLuc））为模板，分别比较体外转录模板（IVT）在添加或不添加Pyrophosphatase (inorganic), HQ（IPP）情况下mRNA合成的产量。在IVT反应中，使用T7 RNA Polymerase, HQ（Code No. 2542A）来合成mRNA，使用Cap类似物CleanCap Reagent AG（3'OMe）（TriLink公司）来合成Cap结构的mRNA。制备过程中向IVT反应体系中加入IPP，浓度为0.005U/μl或0.01U/μl。
说明：核酸合成过程中产生的无机焦磷酸盐（PPi）与体外转录（IVT）反应中聚合酶的辅助因子Mg²⁺反应生成沉淀，抑制合成反应的进行。 Pyrophosphatase (inorganic)（IPP）可以将PPi分解成正磷酸盐（H3PO4），从而阻止沉淀的生成，并促进合成反应的正向进行。
实验结果：无论mRNA是否含有Cap结构，mRNA的产量在添加IPP后均为未添加IPP的2倍。