无偏差预扩增优势

 
传统qPCR无法检测的低起始量样本,可以通过预扩增实验成功的进行分析。
以下实验通过PrimerArray Cell cycle (Human)(Code No.PH002)(Primer Set共包含了88种Pathway相关基因和8种管家基因表达用引物)对Human Universal QUICK-Clone cDNA II(Code No.637260)进行分析。
实验分别对没有预扩增的100 pg cDNA(紫色)以及使用Prelude PreAmp Master Mix进行了10个循环预扩增后的100 pg cDNA(蓝色)进行了比较。没有进行预扩增的样本,96个基因中仅有少数可以通过荧光定量的方法有效检出(Ct<32)。相比之下,qPCR之前进行10个循环预扩增,大大改善了这些数据:进行了10个循环预扩增的样本,96个基因Ct值全部在17~30之间。
 
 
请注意,虽然上图显示了PrimerArray Cell Cycle (Human) panel中全部96个目的基因的定量结果,但是为了保证可读性,x轴仅显示部分基因名称。完整的目的基因定量结果,详见Excel。此外,上图中没有显示未进行预扩增实验且Ct >32目的基因的定量结果。