| |
| 人培养细胞HL60株来源的total RNA为模板的RT-PCR
|
|
| |
| ■ 方法 |
| 模板：人培养细胞HL60株来源的total RNA |
| 扩增大小：约 1 kb、约 2 kb、约 4.4 kb |
| target：Transferrin receptor |
| |
| 反转录反应液的制备 |
| |
| 试剂 |
使用量 |
| 2×Bca 1st Buffer |
10 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
4 μl |
| dNTP Mixture（10 mM） |
1 μl |
| RNase Inhibitor |
0.5 μl |
| BcaBEST polymerase |
1 μl |
| Oligo dT Primer |
1 μl |
| HL60来源 total RNA（1μg/μl） |
1 μl |
| RNase Free dH2O |
1.5 μl |
| Total |
10 μl/sample |
|
|
| |
| 反转录反应条件 |
| |
| 65℃ |
1 min |
1 cycle |
| 30℃ |
5 min |
| ↓gradient |
15 min |
| 65℃ |
30 min |
| 98℃ |
5 min |
| 5℃ |
5 min |
|
|
| |
| |
| PCR反应 |
| |
| 试剂 |
使用量 |
| 反转录反应液 |
20 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
6 μl |
| 5 × Bca 2nd Buffer |
16 μl |
| Bca-Optimized Taq |
0.5 μl |
| 上游PCR引物（20 μM） |
1 μl |
下游PCR引物（20 μM) |
1 μl |
| 灭菌水 |
1 μl |
| RNase Free dH2O |
55.5 μl |
| Total |
100 μl |
|
|
| |
| |
| PCR反应条件 |
| |
| 94℃ |
30 sec |
30 cycles |
| 55℃ |
30 sec |
| 72℃ |
5 min |
|
|
| |
| ■ 结果 |
| |
 |
| |
| |
京公网安备 110114000405号