Takara


模板量使用范围研讨（2 Step RT-PCR）


【方法】
分别加入HL60 Cells total RNA 100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、200 ng、500 ng、1 μg、2 μg、3μg作为模板，使用Oligo dT Primer进行反转录反应。再以5 μl的反转录反应液作为模板，扩增4 kb TFR基因片段。

PCR反应条件
98℃ 10 sec.		30 cycles
55℃ 15 sec.
72℃ 4 min.

【结果】
高达3 μg total RNA的RT反应（20 μl的反转录体系）中，TFR基因得到了良好的扩增，没有扩增抑制。当20 μl RT反应液中的total RNA加量为6 μg时，延伸时间可设置为2 min./kb进行PCR反应。