Takara


扩增片段长度确认（2 Step RT-PCR） PrimeScript^™ II High Fidelity RT-PCR Kit（Code No. R023A）


以人心脏来源的total RNA为模板，使用2 step RT-PCR对Dystrophin基因的不同长度的区域进行扩增。

【方法】
total RNA量为1 μg/20 μl反应体系进行反转录反应（使用oligo dT Primer），然后取5 μl反转录反应液为模板添加到50 μl反应体系（相当于total RNA 250 ng /50 μl PCR反应体系）中，按照下述条件进行PCR反应。

PCR条件
6 kb 以下		8 kb 以上
98℃ 10 sec.	30 cycles	98℃ 10sec.	30 cycles
60 or 55℃ 15 sec.		68℃ 1 min./kb
68℃ 1 min./kb

【结果】
确认长度至13.5 kb都能够得到良好的扩增。