性能确认(1)- 扩增长度(Code No. RR014A) | ||||||||||||
以人心脏来源及HL60细胞来源的total RNA(1 μg/20 μl RT反应体系)为模板、使用Oligo dT Primer进行cDNA合成(42℃、30分钟),取2 μl反转录反应液为模板添加到50 μl PCR反应体系中,对不同大小的目的基因进行扩增(相当于100 ng ?total RNA /50 μl PCR反应体系)。 | ||||||||||||
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PCR反应 | ||||||||||||
0.5~6 kb | 8~12 kb | |||||||||||
94℃ 1 min | 94℃ 1 min | |||||||||||
↓ |
↓ |
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94℃ 30 sec. | 98℃ 10 sec. | 30 cycles | ||||||||||
55℃ 30 sec. | 30 cycles | 68℃ 8 min. or 15 min. | ||||||||||
72℃ 1 min./kb | ||||||||||||
结果显示,0.5~12 kb片段都得到了良好扩增 | ||||||||||||