性能确认(1)- 扩增长度(Code No. RR014A)

 
以人心脏来源及HL60细胞来源的total RNA(1 μg/20 μl RT反应体系)为模板、使用Oligo dT Primer进行cDNA合成(42℃、30分钟),取2 μl反转录反应液为模板添加到50 μl PCR反应体系中,对不同大小的目的基因进行扩增(相当于100 ng ?total RNA /50 μl PCR反应体系)。
 
目的基因 使用total RNA
 Dystrophin 人心脏来源
 Transferrin receptor(TFR) HL60细胞来源
 
PCR反应
 
0.5~6 kb       8~12 kb      
94℃ 1 min       94℃ 1 min      
                   ↓
                       ↓
   
94℃ 30 sec.     98℃ 10 sec.   30 cycles
55℃ 30 sec.   30 cycles 68℃ 8 min. or 15 min.  
72℃ 1 min./kb          
           
 
结果显示,0.5~12 kb片段都得到了良好扩增