Takara

使用LA PCR用Genome DNA Set进行LA PCR反应

利用LA PCR用Genome DNA Set，各DNA与相应的Primer set使用TaKaRa LA Taq进行了PCR扩增。

反应液组成

	反应液量	终浓度
genome DNA	1 μl	Human genome：500 ng E.coli genome：100 ng
10 × LA PCR Buffer II (Mg²⁺plus)	5 μl	1×
25 mM MgCl2	5 μl	2.5 mM
dNTP Mixture	8 μl	400 μM each
Primer #1	1 μl	0.2 μM
Primer #2	1 μl	0.2 μM
TaKaRa LA Taq	0.5 μl	2.5 U/50 μl
灭菌水	up to 50 μl

操作时的注意事项

· 试剂盒内的所有组份在室温～37℃下完全融解后，用移液枪充分吸打混合或上下颠倒混合。尽量不要使用振荡器。
混合10×LA PCR Buffer和TaKaRa LA Taq时，为了防止产生气泡或酶失活，要注意缓慢混合。此外，各组份使用前请置于冰上保存。
· PCR反应液在PCR反应前轻轻吸打混合，不能使用振荡器。

PCR反应条件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler MP】

94℃、1 min	1 cycle
98℃、10 sec 68℃、15 min	30 cycles
72℃、10 min	1 cycle