Takara


易形成二级结构DNA片段的扩增例


与GC rich模板相同，易形成二级结构的模板使用以往的Taq酶也经常难以进行PCR扩增。以下是以易形成二级结构的DNA片段为模板，扩增2.7 kbDNA片段的扩增例。从图1可以看出，使用以往的Taq酶只获得了非特异性扩增产物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可进行很好地PCR扩增。无PCR扩增产物时，一般进行循环圈数的研讨及变更引物的设计等，而使用扩增效率优良的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可提高扩增效果，建议使用此酶。

Template	易形成二级结构的cDNA
	(用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的模板)
扩增片段大小	2.7 kb
Primer	Custom long primer (30～32 mer)
	(各10 pmol/50 μl PCR)引物序列与Application实验中(GC rich DNA片段的扩增例)相同
dNTP Mixture	以7-deaza-dGTP替代dGTP

PCR反应条件
94℃ 1 min
↓
98℃ 20 sec		30 cycles
68℃ 3 min
使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)

* 检测样品由庆应大学·分子生物学学科的高柳先生提供。