PCR扩增产物的稳定性

 
使用TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Uracil DNA Glycosylase(UNG), heat - labile)时
 
【方法】使用Uracil - N - glycosylase(UNG)进行防止扩增产物的残留污染的PCR反应体系,如果UNG酶失活不完全,扩增产物被分解,会导致错误的PCR检测结果。微量的目的基因扩增产物少时要特别注意。使用TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Uracil DNA Glycosylase(UNG), heat - labile)与TaKaRa Taq Hot Start Version对人基因组DNA的1 kb基因片段进行PCR扩增。为了进行比较,使用其他公司耐热性UNG酶,在推荐的添加量下也进行了PCR反应。PCR反应结束后,将PCR反应液在25℃下保温放置72小时和96小时,对残留UNG酶活性对PCR扩增产物的影响进行了比较。
 
【结果】添加Uracil DNA Glycosylase(UNG), heat–labile进行了PCR反应后,在室温下放置96小时后也没有观察到扩增产物的降解。
 
PCR反应条件
           25℃ 10 min(UNG处理)
           95℃ 2 min(UNG热失活)
94℃ 10 sec 30 Cycles
55℃ 30 sec
72℃ 1 min