以亚硫酸氢盐修饰后的HeLa基因组DNA为模板进行PCR扩增反应的实验例

 
【方法】
1. 使用MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit(Code No.ME002)进行亚硫酸氢盐修饰,然后进行PCR扩增反应。
目的基因:CDH1、MLH1、BRCA1 gene上游的CpG岛区域。
扩增片段大小:153 bp (CDH1 )、297 bp (CDH1 )、136 bp (MLH1 )、292 bp (MLH1 )、613 bp (BRCA1 )、1,017 bp (BRCA1 )。
 
2. 按下列组成配制PCR反应液。
试剂 使用量 终浓度
  亚硫酸氢盐修饰后的HeLa基因组DNA (50 ng/μl) 2 μl 100 ng/50 μl
  10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl
  25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
  dNTP Mixture(各2.5 mM) 6 μl 0.3 mM
  Sense Primer(20 μM) 1 μl 0.4 μM
  Antisense Primer(20 μM) 1 μl 0.4 μM
  TaKaRa EpiTaq HS(5 U/μl) 0.25 μl 1.25 U/50 μl
  灭菌水 up to 50 μl  
 
 
3. PCR反应条件
98℃ 10 sec.   30 cycles  
55℃ 30 sec.  
72℃ 30 sec. [30 sec./~500 bp、1 min./500 bp~]  
 
 
【结果】