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| 使用各公司PCR酶扩增亚硫酸氢盐处理后的DNA |
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| 【方法】 |
以亚硫酸氢盐处理后的HeLa基因组DNA为模板，使用TaKaRa EpiTaq HS及其他公司的PCR酶进行扩增。
（处理后的HeLa基因组DNA 100 ng/50 μl反应体系） 反应按以下条件进行。 |
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| 亚硫酸氢盐处理：MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（Code No. ME002） |
| 目的基因：CDKN2A、BRCA1 gene 上游的CpG 岛区域 |
| 扩增大小：144 bp (CDKN2A)、1,017 bp (BRCA1) |
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| ＜反应液组成＞ |
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使用量 |
终浓度 |
| 亚硫酸氢盐处理HeLa 基因组DNA（50 ng/μl） |
2 μl |
100 ng/50 μl |
| 10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) |
5 μl |
1× |
| 25 mM MgCl2 |
5 μl |
2.5 mM |
| dNTP Mixture（各2.5 mM） |
6 μl |
0.3 mM |
| Sense Primer（20 μM） |
1 μl |
0.4 μM |
| Antisense Primer（20 μM） |
1 μl |
0.4 μM |
| TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） |
0.25 μl |
1.25 U/50 μl |
| 灭菌水 |
up to 50 μl |
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| ＜PCR条件＞ |
| 98℃ 10 sec. |
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40 cycles |
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| 55℃ 30 sec. |
| 72℃ ［30 sec.（144 bp）or 1 min.（1,017 bp）］ |
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| （TaKaRa EpiTaq HS以外的其他试剂按各公司反应条件进行反应） |
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| 【结果】 |
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京公网安备 110114000405号