Takara



Multiplex PCR基本反应条件


Multiplex PCR Assay Kit Ver.2（Code No.RR062A/B）

【反应組成】

2×Multiplex PCR Buffer（Mg^2＋, dNTP plus）	25 μl
Primer mix ^*1	适量
Multiplex PCR Enzyme Mix	0.25 μl
DNA模板	适量
灭菌水	up to 50 μl

*1 通常各引物使用的终浓度为0.2 μM。不同的反应，有时改变使用量会对结果有一定改善。引物的Tm值设定在55℃以上 (Tm值按照下面的公式进行计算） Tm值＝ 4 × (G、C数) ＋ 2 × (A、T 数) ＋ 35 － 2 × (总碱基数) 注) 利用Nearest Neighbor 法计算Tm值时，引物的Tm值设置在60℃以上。

【PCR条件】
【引物数在10对以下、扩增片段为～2 kb 的反应条件】
94℃　60 sec.
↓
94℃　30 sec.		25～40 cycles
57～60℃　30～60 sec.
72℃　30～60 sec.
↓
72℃　10 min.

【引物数超过10对时的反应条件】
94℃　60 sec.
↓
94℃　30 sec.		15～30 cycles
60℃　1～10 min. ^*1
↓
72℃　10 min.

*2 延伸时间根据引物数和反应性能不同而不同。使用的引物数为200对时，以4 min为标准进行设定。