Takara



使用SapphireAmp^® 的菌落PCR


SapphireAmp^® Fast PCR Master Mix（Code No. RR350A/B）

对转化了小鼠cDNA来源pUC118文库（插入了0.5 kb～5 kb的DNA片段）的大肠杆菌菌落，利用菌落PCR对插入片段进行确认。

1. 配制反应管数＋α的Master Mix，分装50 μl至PCR反应管。
例）进行8个检测样品的PCR反应

	1个反应		9个反应
SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix）	25 μl		225 μl
M13 Primer M4（20 μM）	0.5 μl		4.5 μl
M13 Primer RV（20 μM）	0.5 μl		4.5 μl
灭菌水	24 μl		216 μl

2. 用灭菌枪头的尖端挑取少量大肠杆菌菌落，悬浮于1. 的PCR反应管中的反应液后进行PCR反应。

PCR反应条件
94℃　1 min.
↓
98℃　5 sec.		30 cycles
55℃　5 sec.
72℃　40 sec.

（PCR反应所需时间：1小时11分钟，使用TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice）


电泳结果




电泳结果可以确认到各种片段大小（0.5 kb～5 kb）的扩增产物。