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粗提样品的扩增例1:小鼠各组织的热碱法提取液 |
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MightyAmp DNA Polymerase(Code No. R071A/B) |
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方法 |
在5~10 mg小鼠尾、肝脏、脾脏、胸腺、脑中添加180 μl的50 mM NaOH,95℃孵育10分钟后加入20 μl 的1 M Tris-HCl(pH8.0)进行中和,获得热碱法提取液。分别以2.5 μl热碱法提取液为模板(25 μl反应体系),使用MightyAmp DNA Polymerase、A公司抗阻害物PCR酶、B公司抗阻害物PCR酶及TaKaRa Taq Hot Start Version(TaKaRa Taq HS)(Code No. R007A),在各自推荐的PCR反应条件下对小鼠Tfrc 基因(2 kb)进行了PCR扩增。取3 μl反应液进行电泳,对反应性能进行了比较。 |
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结果 |
使用TaKaRa Taq HS很少有PCR扩增产物,而使用MightyAmp DNA Polymerase可获得良好的扩增产物,与其他公司抗阻害物PCR酶相比,显示扩增效率更高。 |
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Lane 1. |
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小鼠尾 |
MightyAmp的PCR反应条件:98℃ 2 min. |
2. |
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小鼠肝脏 |
↓
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3. |
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小鼠脾脏 |
98℃ 10 sec |
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35 cycles |
4. |
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小鼠胸腺 |
68℃ 2 min |
5. |
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小鼠脑 |
M. |
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pHY Marker |
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