直接PCR例7:口腔细胞悬浮液 | ||||||
MightyAmp DNA Polymerase Ver.2 (Code No. R071A/B) | ||||||
· 口腔细胞悬浮液的制备方法 (1) 用灭菌棉棒在脸颊内侧擦拭10次。 (2) 将棉棒放入到已装有Buffer(A或B)的反应管中搅拌5次,在管壁按压棉棒。 |
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· Buffer A:TE Buffer 300 μl Buffer B:TE Buffer 300 μl+20 mg/ml Protinase K 1.5 μl (3) 使用Buffer B的检测样品,为了使Proteinase K失活,98℃处理2分钟。 |
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· 将制备的口腔细胞悬浮液(0.5 μl、1 μl及2 μl)直接添加到反应体系中(20 μl) | ||||||
· 目的基因:p53基因 515 bp | ||||||
· PCR反应条件 | ||||||
98℃ 2 min. | ||||||
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98℃ 10 sec | 35 cycles | |||||
60℃ 15 sec | ||||||
68℃ 30 sec | ||||||
· 使用TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient(Code No.TP600) | ||||||
· 电泳上样量:3 μl | ||||||
· 凝胶:1% Agarose L03 「TAKARA」 | ||||||