客户实验例5:使用In-Fusion® Cloning System构建基因编辑敲除用供体载体(3个插入片段的In-Fusion克隆)

 
【实验内容】
使用In-Fusion HD Cloning Kit,对3.0 kb 载体中的Puromycin抗性基因cassette(2.5 kb)、CRISRP/Cas9切断部位的Right及Left arm(分别为0.7/0.6 kb)3个插入片段进行克隆。图中红线显示部位的限制酶切断位点。
 
 
【结果】
用X-Gal/IPTG进行蓝白筛选,从得到的大量克隆中挑取10个白色克隆,通过限制酶及测序确认位点时,根据载体种类的不同,载体1及载体2分别以9/10及7/10的高效率获得目的重组载体(红色序号列)。
 
 
 
【数据提供】:九州大学研究院医学研究院 癌分子病态学讲座
飯森 真人様(助教)
新美 晋一郎様(研究员)