Takara

肠出血性大肠杆菌O-157 的Vero毒素基因的检出

【方法】

模板DNA：

大肠杆菌O-157热提取液

control template EC3

目的基因：

Vero毒素基因：171 bp

control template EC3：685 bp

反应液组份和PCR反应条件：

使用TaKaRa Z-Taq

· 1×Z-Taq Buffer

· 200 μM dNTP Mixture

· 400 nM Primer EVC-1

· 400 nM Primer EVC-2

· 2.5 U TaKaRa Z-Taq

· control template EC3

· O-157菌体热提取液（检测样品）

使用TaKaRa Thermal Cycler Personal（Fast mode）

98℃ 10秒	35 Cycles
55℃ 10秒
72℃ 7秒

总反应时间：44分钟

使用TaKaRa Ex Taq

（使用O-157 One Shot PCR Screening Kit［Code No. RR102A］）

· 1×Ex Taq Buffer

· 200 μM dNTP Mixture

· 200 nM Primer EVC-1

· 200 nM Primer EVC-2

· TaKaRa Ex Taq 2.5 U

· control template EC3

· O-157菌体热提取液（检测样品）

使用TaKaRa Thermal Cycler MP

94℃ 1分	35 Cycles
55℃ 1分
72℃ 1分
72℃ 10分

总反应时间：160分钟

【结果】

使用TaKaRa Z-Taq，反应时间（44分钟）是目前为止使用O-157 One Shot PCR Screening Kit（约160分钟）的1/4，且检测结果相当。因此，
从制备菌体热提取液（检测样品）至电泳检出仅需1.5小时。此外，10 cells/反应体系可检测出Vero毒素基因，维持着高检测灵敏度。
由此可以看出，高速PCR用DNA聚合酶、TaKaRa Z-Taq可有效用于检测样品多、需要快速进行结果判定的食品的病原微生物检查及临床检查中。