使用LA PCR用Genome DNA Set进行LA PCR

 
利用LA PCR用Genome DNA Set中的各DNA和相应的Primer set,使用TaKaRa LA Taq进行了PCR扩增。
 
■ 反应液组成
  使用量 终浓度
genome DNA 1 μl human genome:500 ng
E.coli genome:100 ng
10×LA PCR Buffer II (Mg2+ free) 5 μl ×1
25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
dNTP Mixture 8 μl 400 μM each
Primer #1 1 μl 0.2 μM
Primer #2 1 μl 0.2 μM
TaKaRa LA Taq 0.5 μl 2.5 U/50 μl
灭菌水 up to 0.5 μl 2.5 U/50 μl
 
 
■ 操作时的注意事项
· 试剂盒中的试剂在室温~37℃下完全融解后,充分吸打混合或上下颠倒混合。避免振荡混合。10×LA PCR Buffer、
   TaKaRa LA Taq吸打混合时要注意防止气泡产生及酶的失活。此外,试剂使用前在冰上保存。
· 配制的反应液在反应前轻轻吸打混合。绝对不能振荡混合。
 
■ PCR条件
94℃、1 min 1 cycle
98℃、10 sec
68℃、15 min
30 cycles
72℃、10 min 1 cycle
 
■ 结果
 
 
 
(Takara Bio Inc.比较数据)
 
Thermal Cycler:TaKaRa PCR Thermal Cycler MP
gel:3% NuSieve 3:1 Agarose gel
上样量:8 μl/50 μl