Takara



易形成二级结构DNA片段的扩增例


同GC rich DNA片段相同，易形成二级结构的模板使用以往的Taq酶也难以进行PCR扩增。

下面是以易形成二级结构的DNA片段为模板，扩增片段大小为2.7kb的扩增例。
从图1可以看出，使用以往的Taq酶有非特异性扩增产物，而使用TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）可进行良好的扩增。没有PCR扩增产物时，一般需进行PCR条件研讨及重新设计引物等，而使用高扩增效率的TaKaRa LA Taq （LA PCR Buffer II）即可改善PCR扩增反应。强烈建议使用本酶。

Template：	易形成二级结构的cDNA (用EcoR I酶切后插入到pBluescript II的cDNA)
扩增片段大小：	约2.7 kb
Primer*：	Custom long primer (30～32 mer) (各10 pmol/50 μlPCR) 引物序列与GC rich DNA 片段的扩增例实验使用的引物相同
dNTP Mixture：	以7-deaza-dGTP替代dGTP
PCR条件：	94℃ 1 min
	↓
	98℃ 20 sec.	30 cycles
	68℃ 3 min.
(使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)

DNA样品由庆应大学?分子生物学讲座的高柳先生提供