Takara



PrimeSTAR^® GXL DNA Polymerase


粗提样品扩增实验例4：植物叶经Plant DNA Isolation Reagent简易制备提取液

如MightyAmp DNA Polymerase（Code No.R071A/B、R076A/B）、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase（Code No. R050A/B）。

Takara Bio的Plant DNA Isolation Reagent （Code No. 9194）是以氯化苄法为基础构建的Ready-to-use试剂盒，只需要简单的操作就可以从植物材料中提取基因组DNA。使用该试剂盒简易制备的DNA溶液，含有一定程度植物来源的PCR阻害物，使用该溶液进行PCR实验时推荐使用TaKaRa Ex Taq Hot Start Version、MightyAmp DNA Polymerase、或PrimeSTAR GXL DNA Polymerase进行反应。

方法：	以拟南芥幼叶、西红柿幼叶、或者菠菜成熟叶提取的基因组DNA溶液为模板、使用各酶的推荐条件进行PCR反应、通过电泳确认扩增产物。
目的基因和扩增大小：	拟南芥MERI5B基因（约1.0 kb）、西红柿XET基因（约0.6 kb）、菠菜coxI基因（约0.5 kb）。
使用量：	基因组DNA提取液原液及稀释液各使用2 μl/25 μl反应体系 Lane 1：原液　2：2倍稀释液　3：5倍稀释液　4：10倍稀释液 5：20倍稀释液　6：40倍稀释液　M：250 bp DNA Ladder

（1）使用10～20 mg样品进行简易制备的DNA溶液


（2）100 mg样品经简易制备，得到的含有较多阻害物质的DNA溶液
2-1. MightyAmp提高反应性，2-2. 使用快速操作得到的改善（GXL）液


■ 植物来源简易制备的基因组DNA为模板时 ◆ 重视反应性的扩增推荐使用TaKaRa Ex Taq Hot Start Version、MightyAmp DNA Polymerase 、TaKaRa Ex Taq HS能够对核酸量大的样品进行良好的扩增植物来源的样品含较多的PCR阻害物时，通过使用MightyAmp能够进一步提高反应性。 ◆ 对于追求准确性的扩增推荐使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 多数High Fidelity PCR酶用于核酸含量高的样品扩增时效果不是很理想，PrimeSTAR GXL能够用于核酸含量更宽的样品且能有效抵抗PCR阻害物质的影响。