Takara

Tks Gflex^™ DNA Polymerase Low DNA (Code No.R091)

反应液组成和PCR条件

反应液组成

试剂	使用量	终浓度
Tks Gflex DNA Polymerase Low DNA (2×)	10 μl	1×^*1
Template	＜200 ng
Primer 1	4～6 pmol	0.2～0.3 μM^*2
Primer 2	4～6 pmol	0.2～0.3 μM^*2
dH2O for Low DNA	up to 20 μl

*1 Mg⁺² 1 mM、dNTP 各200 μM。
*2 扩增10 kb以上长片段时，以终浓度0.2 μM进行反应。
当使用简并引物时，以终浓度≥0.6 μM进行反应。

PCR反应条件

94℃ 1 min.^*1

↓

98℃ 10 sec.

30-35 cycles^*3

55-60℃^*2 15 sec.

68℃ 60 sec./kb

*1 扩增富含GC序列或长片段时，推荐进行94℃ 1 min.的预变性反应。
*2 由于反应体系采用了高特异性的缓冲液，因此退火温度高于60℃时，不能获得良好的实验结果。
在标准PCR反应条件下即可进行特异性扩增。
*3 当模板量低时，适当增加循环数。