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| Poly(A) Polymerase |
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| 在RNA上加上Poly(A)尾 |
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| 1. 在微量离心管中配制下列反应液。 |
| 10×Poly(A) Polymerase Buffer |
5 μl |
| MnCl2 |
5 μl |
| DTT |
5 μl |
| 0.1% BSA |
10 μl |
| ATP |
0.5 μl |
| RNA |
10 μM |
| Poly(A) Polymerase（0.2～2 U/μl） |
5 U |
| RNase free H2O |
up to 50 μl |
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| 2. 37℃反应30分钟。 |
| 3. 加入50 μl（等量）的苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），充分混匀。 |
| 4. 离心，取上层（水层）移至另一微量离心管中。 |
| 5. 加入50 μl（等量）的氯仿/异戊醇（24：1），充分混匀。 |
| 6. 离心，取上层（水层）移至另一微量离心管中。 |
| 7. 加入5 μl（1/10量）的3 M NaOAC（pH5.2）。 |
| 8. 加入125 μl（2.5倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。 |
| 9. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 |
| 10. 用于以后实验。 |
| 注）如需得到高纯度的Poly(A)RNA时，可以在操作2.后用Oligo(dT)-Cellulose层析进行纯化。 |
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