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| PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase |
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| 最适参数的设定 |
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| 为了发挥PrimeSTAR GXL DNA Polymerase的最大性能、获得良好的PCR扩增结果，有必要按照最适参数进行设定。 |
| （1）Primer的设计 |
| 引物最好利用专业引物设计软件进行设计（选择最适的引物序列）,如OLIGO™ Primer Analysis Software (Molecular Biology Insights, Inc.)。 |
| 【扩增DNA片段≦10 kb时】 |
| 一般引物长度为20-25 mer即可获得良好的扩增，当引物的Tm值（使用操作流程中的公式计算）在55℃以上，或引物长度在25 mer以上，可进一步提高PCR反应的成功率。使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase时，避免使用含次黄嘌呤核苷碱基（Inosine）的引物。 |
| 【扩增DNA片段＞10 kb时】 |
| 建议引物Tm值在65℃以上，引物长度为25-35 mer，设计引物时3’端的GC含量不要过高。 |
| 【靶基因GC rich时】 |
| 建议引物的Tm值在60℃以上。 |
| NOTE：使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase时，避免使用含次黄嘌呤核苷碱基（Inosine）的引物。 |
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| （2）dNTP与Mg2＋ |
| 由于dNTP具有螯合作用，dNTP浓度过高就会使实际参与反应的Mg2＋浓度下降。 |
| PrimeSTAR GXL DNA Polymerase配带的5×PrimeSTAR GXL Buffer中含有的Mg2＋终浓度为1 mM、dNTP终浓度为200 μM each，是获得良好扩增结果的最适反应体系。尽量避免变更dNTP在反应体系中的浓度。 |
| 使用PrimeSTAR GXL DNA Polymerase时，不能用dUTP代替dTTP（使反应性能明显下降）。 |
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| （3）模板 |
| 建议使用的模板量如下(50 μl反应体系)： |
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（普通扩增时） |
（扩增大片段DNA时） |
| 人基因组DNA |
5 ng～500 ng |
100 ng～500 ng |
| 大肠杆菌基因组DNA |
100 pg～200 ng |
10ng～200 ng |
| λDNA |
10 pg～10 ng |
1 ng～10 ng |
| cDNA |
25 ng～750 ng |
250 ng～750 ng |
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* 亚硫酸氢盐处理后的含有尿嘧啶的DNA为模板时不能使用本制品。
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