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PrimeSTAR HS^® DNA Polymerase

存在PCR反应阻害物（SDS、腐殖酸）时与其他酶的活性比较

以怀疑有SDS及腐殖酸污染的DNA为模板进行PCR反应时，使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase可有效进行PCR扩增。

（1）存在SDS时的酶活性

有时以含SDS的检测样品为模板进行PCR反应。因PrimeSTAR HS DNA Polymerase不易受到SDS对PCR反应的阻害，所以含SDS的检测样品也可放心使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase。

使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase（rTaq），在PCR反应液中加入SDS后对SDS对PCR反应的阻害进行了研讨。反应体系以E. coli 基因组DNA为模板，扩增1.5 kb DNA片段。

使用rTaq，反应体系中的SDS终浓度为0.005%时，完全阻害PCR反应。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase，即使反应体系中的SDS终浓度为0.01%时也可扩增。

（A）使用rTaq （B）使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase

图存在SDS时的PCR反应

Lane M：	λ-Hind III digest
Lane 1：	未添加SDS和模板
Lane 2：	SDS终浓度为0.01%
Lane 3：	SDS终浓度为0.005%
Lane 4：	SDS终浓度为0.002%
Lane 5：	SDS终浓度为0.001%
Lane 6：	未添加SDS

（2）存在腐殖酸时的酶活性

近来研究经常使用从土壤等环境样品直接提取的DNA进行分析。使用这种方法提取的DNA作为检测样品进行PCR反应时，必须注意要防止腐殖酸的污染。腐殖酸在土壤中分为2部分，一部分溶于碱，一部分不溶于酸，除土壤外海底堆积物等含有的红褐色或黑褐色的有机物。即使微量的腐殖酸也对PCP反应有很强阻害作用。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase即使存在腐殖酸也能发挥酶的活性，可检测的检测样品范围。将粗提的腐殖酸液（土壤提取液）*稀释后加入到PCR反应液中，使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase和rTaq对腐殖酸对PCR反应的阻害进行了研讨。反应体系以E. coli 基因组DNA为模板，扩增1.5 kb DNA片段。

使用rTaq，即使添加0.01μl腐殖酸时也有很强的阻害作用。而使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase，添加0.01 μl腐殖酸时与未添加腐殖酸的PCR同样可以进行扩增。因此，对于含SDS和腐殖酸污染的DNA模板，PrimeSTAR HS DNA Polymerase也能有效扩增。

*：腐殖酸不是标准的试剂，是从土壤中用碱溶出后，经酸溶液沉淀，再用碱溶液溶解获得。原液A280＝10、A700＝0。

（A）使用rTaq

（B）使用PrimeSTAR HS DNA Polymerase

图存在腐殖酸时的PCR反应

Lane M：	λ-Hind III digest
Lane 1：	未添加腐殖酸和模板
Lane 2：	腐殖酸溶液添加量0.1 μl
Lane 3：	腐殖酸溶液添加量0.01 μl
Lane 4：	腐殖酸溶液添加量0.001 μl
Lane 5：	腐殖酸溶液添加量0.0001 μl
Lane 6：	未添加腐殖酸